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Human SCF ELISA
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碧云天的Human SCF ELISA Kit (Human Stem Cell Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即人干细胞因子酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的SCF的ELISA试剂盒。本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。多次重复检测结果表明,最小检出量为13.6pg/ml,与人EGF、Epo、G-CSF、GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、LIF、TGF-β1、TNF-α等均没有交叉反应,板内、板间变异系数均小于10%。干细胞因子(Stem Cell Factor, SCF)是一种多效性细胞因子。最初人们认为人和小鼠干细胞因子cDNA编码产生包括25个氨基酸残基信号肽、189个氨基酸残基胞外域、23个氨基酸残基跨膜区和36个氨基酸残基胞质域的跨膜蛋白。随后的分析结果显示在小鼠体内由于外显子缺失会产生比正常SCF少28个氨基酸残基的SCF变体。目前证实在人和小鼠体内都存在248个氨基酸的SCF及220个氨基酸的SCF剪切变体,两种变体分子量分别为45kDa (KL-1)和32kDa (KL-2)。两种形式的SCF通过蛋白裂解都能得到游离形式的SCF。无论是游离的SCF还是跨膜SCF都具有生长因子活性。能够产生SCF的细胞主要有成纤维细胞、肝细胞、精原细胞、内皮细胞、神经元细胞、巨噬细胞、卵母细胞、施万细胞、细胞滋养层细胞、复层扁平上皮细胞和多种肿瘤细胞。天然的游离SCF是一种N或O连接高度糖基化蛋白,通常以非共价键相连的二聚体形式存在,SCF单体中的4个半胱氨酸残基都参与分子间二硫键的形成。利用大肠杆菌重组得到的游离SCF在体外与天然的SCF具有相同的生物学活性,这提示糖基化并非游离SCF发挥活性所必须。无论是小鼠还是大鼠SCF都与人SCF具有高度的同源性,在氨基酸序列上具有约80%的相似性。小鼠SCF和大鼠SCF也都能作用于人源细胞发挥作用,然而人SCF对小鼠或大鼠细胞的作用活性则要低许多。SCF主要在胚胎发育和出生后阶段调节黑色素细胞、原生殖细胞和造血祖细胞活性。SCF还能刺激成熟或未成熟肥大细胞的增殖,刺激巨噬细胞炎症调节因子的分泌。SCF与其它生长因子如IL-3、IL-6、IL-11、GM-CSF、G-CSF和Epo协同作用诱导髓系红细胞系造血祖细胞集落形成。与IL-3共同作用,SCF还能作为多功能(CD34+/4-HCres)干细胞的生长分化因子。在受到高剂量射线辐射时,SCF还能保护人体骨髓祖细胞免受损害。SCF的其他生物活性还与精原细胞增殖 、CD45+B细胞扩增有关。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人SCF的浓度,其原理见图1。人SCF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标准品或样品时,其中的人SCF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人SCF抗体后,生物素化抗人SCF抗体与人SCF结合,形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin),由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合,因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液,固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人SCF浓度与A450值呈正比,通过绘制标准曲线,对照样品吸光度值,即可计算出样品中人SCF浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒,包括标准品检测,可以进行96次检测。包装清单:
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