细胞膜染色试剂CM-Dil说明书

【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：细胞膜染色试剂CM-Dil说明书
英文名称：
产品规格：200μl
发货周期：1～3天
细胞膜荧光染料CM-DiI是一种新型细胞膜染料，通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞，适合监测细胞运动以及细胞定位分析。因具有良好的染料维持性，可用以追踪多次传代细胞的运动特性。其有着强而稳定的红色荧光(Ex/Em=553/570nm)，与绿色荧光染料以及蛋白具有良好的荧光分辨性，适合做多重指标染色。
CM-Dil水溶性较好，便于悬浮细胞和固定细胞染色溶液的制备；工作浓度下，此染料无细胞毒性，不会影响细胞活力以及增殖能力。一些细胞经CM-Dil染色后，可在后续的固定，透化和石蜡包埋处理中维持稳定的标记，因此特别适用于同时做细胞膜标记以及后续的免疫组化，荧光原位杂交或者电镜观察的实验。
研究证实，CM-DiI标记后荧光在胞内表达稳定，阳性标记率达98%以上，标记细胞形态良好，能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况；或将标记的细胞注入体内，可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。
CM-DiI标记细胞呈红色荧光，荧光波长λex=553nm,λem=570nm。
储存条件-20避光保存。
有效期一年。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
细胞膜染色试剂CM-Dil说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
 2,5-二叔-1,4-ENA-6-Screen
 辛缩水甘油Encephalitozoon cuniculi (guinea pig) EcoElisa
 4-肉桂腈Encephalitozoon cuniculi (hamster EcoElisa
 对肉桂Encephalitozoon cuniculi (hamster) EcoElisa
 3--2,6-啶二盐盐Encephalitozoon cuniculi (mouse) EcoElisa
 2,3-二羟Encephalitozoon cuniculi (rat) EcoElisa
 2-异-3-氧嗪Endothelin 2 (ET-2) (human - canine)
 Endothelin-1 (H - R - M - B - P - C - R)
 2-溴-4,5-二Entamoeba histolytica IgG (Amebiasis) Elisa
 2,3-二-4-溴Epstein Barr Virus (EBV-EBNA) IgG
细胞膜染色试剂CM-Dil说明书甘草次(β型),18beta甘草次(标准品)英文名(EN)2Methylindole特价促销  规格(SP)25G
甘草苷（标准品）英文名(EN)Indole特价促销  规格(SP)25G
甘草素（消旋）英文名(EN)Tryptophol, >97.0%特价促销  规格(SP)1G
甘草素(左旋)（标准品）英文名(EN)3,5Dimethylbenzo[b]thiophene,≥97.0%特价促销  规格(SP)1G
甘草英文名(EN)3Methylbenzothiophene,≥96.0%特价促销  规格(SP)1G
甘草(标准品)英文名(EN)1Chloroiodobenzene,≥99.0 %特价促销  规格(SP)5g
甘草单铵盐英文名(EN)3Iodotoluene,≥99.0 %特价促销  规格(SP)25G
甘草单铵盐(标准品)英文名(EN)2Bromooctylthiophene, ≥97.0 %特价促销  规格(SP)5G
甘草二铵盐英文名(EN)3Dodecylthiophene,≥98.0 %特价促销  规格(SP)1G
甘草二铵盐（标准品）英文名(EN)2Bromododecylthiophene,≥95.0 %特价促销  规格(SP)1G
甘草二（标准品）英文名(EN)2,5Dibromo,4dinitrothiophene,特价促销  规格(SP)1G
甘胆 ;甘胆英文名(EN)2,5Dibromohexylthiophene ,≥97.0 %特价促销  规格(SP)1G
甘露（标准品）英文名(EN)2Bromohexylthiophene, ≥98.0 %特价促销  规格(SP)1G
甘露（标准品）英文名(EN)3Butylthiophene,≥98.0 %特价促销  规格(SP)1G
甘露；D甘露糖英文名(EN)2,3Dibromothiophene ,≥97.0%特价促销  规格(SP)1G
甘露糖；D甘露糖英文名(EN)2Chlorobromo thiophene特价促销  规格(SP)1G
甘罗溴铵（标准品)英文名(EN)2,5Dichlorothiophene,≥98.0 %特价促销  规格(SP)25G
甘油英文名(EN)2Nitrothiophene ,≥98 %特价促销  规格(SP)5G
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。