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- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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23
- 英文名：
DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50次
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)哪家好
英文名称：DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column
产品规格：50次
发货周期：1～3天
本试剂盒是目前最先的DNALadder抽提试剂盒之一。本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提最小片段为180-200bp的DNAladder，同时又可以抽提到最大50kb左右的基因组DNA。本试剂盒可以抽提50个样品。
DNAladder也称DNAfragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNAladder，就可以判定细胞发生了凋亡。
样品首先被蛋白酶K消化，随后加入适合DNA结合到纯化柱上的缓冲液，然后加入到纯化柱内。通过高速离心，使DNA在穿过纯化柱的瞬间，结合到纯化柱上，随后通过两次洗涤去除各种杂质，最后通过洗脱液把DNA洗脱下来。整个过程无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，样品裂解后仅需约15分钟即可完成。
通过DNA纯化柱方式抽提DNAladder比用传统的酚氯仿抽提酒精沉淀方法更加便捷，小片段DNA不容易损失。试剂盒提供了RNaseA，可以获得不含RNA的高纯度总DNA，排除了RNA对DNAladder观察造成的干扰。
本试剂盒每次最多可以抽提20mg组织或200-350万个培养细胞。样品用量过多，反而会影响抽提效果。纯化柱对于DNA的最大容量约为30微克。通常每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA，每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA，每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA，每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA。样品的用量请勿超过纯化柱的容量，样品用量最好能保持在纯化柱容量的70%或以下。当然过少的样品也不利于检测到DNAladder。
对于培养细胞的凋亡检测，通常6孔板一个孔的细胞就足够用于DNAladder的抽提和检测。
试剂盒组份
样品裂解液A——————10ml
样品裂解液B——————11ml
洗涤液I——————21ml(第一次使用前加入7ml无水乙醇)
洗涤液II——————16ml(第一次使用前加入24ml无水乙醇)
洗脱液——————22ml
蛋白酶K——————1.1ml
RNaseA——————220μl
DNA纯化柱及废液收集管——————50套
储存条件室温，有效期一年。(蛋白酶K需-20℃保存)
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)哪家好待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
泼尼松龙1-壬醇/第九醇/辛基醇/壬醇/九碳醇/天竺葵醇/正壬醇/1-Nonanol
异香酚无水二化锡/无水化亚锡/Tin(II) chloride anhydrous
盐酸特罗无水化钴/二化钴/化亚钴/Cobalt(Ⅱ) Chloride
鞣花酸化钴/六水合化钴/二化钴/化亚钴/Cobalt chloride hexahydrate
鞣花酸无水化钙/Calcium chloride anhydrous
羟基酪醇化钙/二水合化钙/二水化钙/结晶化钙/Calcium chloride dihydrate
针叶樱桃提取物化酰胆碱/酰化胆碱/2-(酰氧基)-N,N,N-三基铵化物/ACH
17α-炔基雌二醇化胆碱/化胆脂/(2-羟基)三基化铵/2-羟基三基化铵/Choline chloride
叶绿醇无水化镁/卤粉/二化镁/Magnesium chloride
异龙化镁/化镁六水合物/六水化镁/Magnesium chloride hexahydrate
细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)哪家好外根鞘细胞 规格20mg Mouse Amylin ELISA Kit
内根鞘细胞 规格20mg Mouse Proinsulin ELISA Kit
角质细胞 规格20mg Mouse IGFBP4 ELISA kit
淋巴内皮细胞 规格200mg Mouse Insulin-like growth factor binding protein 3 ELISA KIT
淋巴成纤维细胞 规格20mg Mouse Insulin-like growth factor binding protein 2, IGFBP2 ELISA KIT
扁桃体上皮细胞 规格50mg Mouse IGFBP1 ELISA Kit
口腔角质细胞 规格20mg Mouse Insulin-like growth factor binding protein 1, IGFBP1 ELISA Kit
牙龈成纤维细胞 规格100mg Mouse Insulin-like growth factor 2, IGF-2 ELISA Kit
牙周膜成纤维细胞 规格20mg Mouse Insulin-like growth factor 1, IGF-1 ELISA Kit
食道平滑肌细胞 规格20mg Mouse Insulin Receptor β（ISR-β）ELISA KIT
食道上皮细胞 规格25mg Mouse Insulin ELISA Kit
胃平滑肌细胞 规格20mg Mouse nitric oxide synthase ELISA KIT
肠微血管内皮细胞 规格20mg Mouse NO ELISA Kit
肠平滑肌细胞 规格20mg Mouse OxLDL ELISA Kit
结肠微血管内皮细胞 规格20mg Mouse Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor，PDGF sRα ELISA kit
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)哪家好
英文名称：DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column
产品规格：50次
发货周期：1～3天
本试剂盒是目前最先的DNALadder抽提试剂盒之一。本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提最小片段为180-200bp的DNAladder，同时又可以抽提到最大50kb左右的基因组DNA。本试剂盒可以抽提50个样品。
DNAladder也称DNAfragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNAladder，就可以判定细胞发生了凋亡。
样品首先被蛋白酶K消化，随后加入适合DNA结合到纯化柱上的缓冲液，然后加入到纯化柱内。通过高速离心，使DNA在穿过纯化柱的瞬间，结合到纯化柱上，随后通过两次洗涤去除各种杂质，最后通过洗脱液把DNA洗脱下来。整个过程无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，样品裂解后仅需约15分钟即可完成。
通过DNA纯化柱方式抽提DNAladder比用传统的酚氯仿抽提酒精沉淀方法更加便捷，小片段DNA不容易损失。试剂盒提供了RNaseA，可以获得不含RNA的高纯度总DNA，排除了RNA对DNAladder观察造成的干扰。
本试剂盒每次最多可以抽提20mg组织或200-350万个培养细胞。样品用量过多，反而会影响抽提效果。纯化柱对于DNA的最大容量约为30微克。通常每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA，每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA，每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA，每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA。样品的用量请勿超过纯化柱的容量，样品用量最好能保持在纯化柱容量的70%或以下。当然过少的样品也不利于检测到DNAladder。
对于培养细胞的凋亡检测，通常6孔板一个孔的细胞就足够用于DNAladder的抽提和检测。
试剂盒组份
样品裂解液A——————10ml
样品裂解液B——————11ml
洗涤液I——————21ml(第一次使用前加入7ml无水乙醇)
洗涤液II——————16ml(第一次使用前加入24ml无水乙醇)
洗脱液——————22ml
蛋白酶K——————1.1ml
RNaseA——————220μl
DNA纯化柱及废液收集管——————50套
储存条件室温，有效期一年。(蛋白酶K需-20℃保存)
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)哪家好待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
泼尼松龙1-壬醇/第九醇/辛基醇/壬醇/九碳醇/天竺葵醇/正壬醇/1-Nonanol
异香酚无水二化锡/无水化亚锡/Tin(II) chloride anhydrous
盐酸特罗无水化钴/二化钴/化亚钴/Cobalt(Ⅱ) Chloride
鞣花酸化钴/六水合化钴/二化钴/化亚钴/Cobalt chloride hexahydrate
鞣花酸无水化钙/Calcium chloride anhydrous
羟基酪醇化钙/二水合化钙/二水化钙/结晶化钙/Calcium chloride dihydrate
针叶樱桃提取物化酰胆碱/酰化胆碱/2-(酰氧基)-N,N,N-三基铵化物/ACH
17α-炔基雌二醇化胆碱/化胆脂/(2-羟基)三基化铵/2-羟基三基化铵/Choline chloride
叶绿醇无水化镁/卤粉/二化镁/Magnesium chloride
异龙化镁/化镁六水合物/六水化镁/Magnesium chloride hexahydrate
细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)哪家好外根鞘细胞 规格20mg Mouse Amylin ELISA Kit
内根鞘细胞 规格20mg Mouse Proinsulin ELISA Kit
角质细胞 规格20mg Mouse IGFBP4 ELISA kit
淋巴内皮细胞 规格200mg Mouse Insulin-like growth factor binding protein 3 ELISA KIT
淋巴成纤维细胞 规格20mg Mouse Insulin-like growth factor binding protein 2, IGFBP2 ELISA KIT
扁桃体上皮细胞 规格50mg Mouse IGFBP1 ELISA Kit
口腔角质细胞 规格20mg Mouse Insulin-like growth factor binding protein 1, IGFBP1 ELISA Kit
牙龈成纤维细胞 规格100mg Mouse Insulin-like growth factor 2, IGF-2 ELISA Kit
牙周膜成纤维细胞 规格20mg Mouse Insulin-like growth factor 1, IGF-1 ELISA Kit
食道平滑肌细胞 规格20mg Mouse Insulin Receptor β（ISR-β）ELISA KIT
食道上皮细胞 规格25mg Mouse Insulin ELISA Kit
胃平滑肌细胞 规格20mg Mouse nitric oxide synthase ELISA KIT
肠微血管内皮细胞 规格20mg Mouse NO ELISA Kit
肠平滑肌细胞 规格20mg Mouse OxLDL ELISA Kit
结肠微血管内皮细胞 规格20mg Mouse Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor，PDGF sRα ELISA kit
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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