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- 2025年07月14日
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- 文献和实验
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30
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详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
20μL
英文名称：
产品规格：20μL
发货周期：1～3天
ER-Red染料是细胞渗透性的活细胞染料，对内质网(ER)有高度选择性；如用手册提供的方法进行染色，染色图案在甲醛固定后部分保留。该染料含绿色荧光BODIPYemojiTR染料和格列本脲。格列本脲（优降糖）能结合到内质网上突出的ATP-敏感K+通道的磺脲类受体上；格列本脲的药理学活性可能影响内质网功能。某些特化细胞中磺脲类受体的可变表达可能导致非内质网标记。
浓度1mMinDMSO
分子式C44H42BClF2N6O7S2
分子量915.2316
建议工作浓度1μM
储存-20℃，避光，有效期6个月。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．内质网红色荧光探针(ER-Tracker Red)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验「生于忧患，死于安乐」，连细胞也是如此？剑桥大学研究揭示「压力」对细胞有何好处…
茨海默症提供了新型利器！ 图 1：来源 Nature Communications 一、「压力」下的内质网 内质网（ER）作为哺乳动物细胞中发现的一种膜结构，它负责生产大约三分之一的蛋白质，包括合成、折叠、修饰和运输细胞表面或外部所需的蛋白质，执行许多重要的功能。 本研究通过建立了一种基于细胞惰性亚稳态替代蛋白的光学方法（HT-aggr 探测系统），检测内质网处理蛋白质折叠和聚集的生理过程。 作者们最初预想是，对内质网施加压力可能会导致蛋白质错误折叠和聚集，减少其正确发挥功能的能力，从而导致
Nature Communications｜压力对细胞有何好处？
地折叠，则为攻克阿尔茨海默症提供了新型利器！ 图 1：来源 Nature Communications 一、「压力」下的内质网 内质网（ER）作为哺乳动物细胞中发现的一种膜结构，它负责生产大约三分之一的蛋白质，包括合成、折叠、修饰和运输细胞表面或外部所需的蛋白质，执行许多重要的功能。 本研究通过建立了一种基于细胞惰性亚稳态替代蛋白的光学方法（HT-aggr 探测系统），检测内质网处理蛋白质折叠和聚集的生理过程。 作者们最初预想是，对内质网施加压力可能会导致蛋白质错误折叠和聚集，减少
）也跟pH值有关。作者根据这个特性，采用双光子显微镜可以一秒一秒地跟着活体细胞内pH值变化。 作者采用红色荧光探针，为多颜色多通道成像研究保留了绿色荧光波长的通道作为其他细胞特性的研究（如能量代谢等）。 参考文献：J. Am. Chem. Soc. doi:10.1021/ja202902d (2011) 原文内容： Nature News: A microscopist’s litmus test Jun 23, 2011 Vol.474
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