蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)说明书

实验报告：
一、蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)说明书分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)说明书
英文名称：Protease inhibitor Cocktail
产品规格：1ml
发货周期：1～3天
蛋白酶抑制剂(ProteaseInhibitor)是指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合，使蛋白酶活力下降甚至消失但不使酶蛋白变性的物质。蛋白酶抑制剂有很多种，包括EDTA、E-64、NaVO3、Bestatin、Leupetin、PepstatinA、Aprotinin等均可有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)主要由Leupetin、PepstatinA、Aprotinin、E-64等组成，不含EDTA。
该混合物可以抑制绝大多数蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱酸蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。
该蛋白酶抑制剂混合液是100×的浓缩的DMSO溶液，适用于从哺乳动物组织、细胞中提取蛋白质，能够更有效的获得目的蛋白质。提取出来的蛋白可以用于WesternBlot、免疫共沉淀等试验。
操作步骤(仅供参考)
1．开盖前请低速离心一下，以便将黏附于管壁的液体甩至管底。
2．使用时,根据裂解液的用量加入蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)，使其终浓度达到1×。
注意事项
1．蛋白酶抑制剂混合液有轻微刺激性，小心操作，同时应避免反复冻融。
2．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件-20℃避光，有效期1年。
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
 Tetracycline hydrochloride 质量规格：
茴香 Carbenicillin disodium 质量规格：>90%,BR
正 Carbenicillin disodium 质量规格：含量测定
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3,4二 Fenbendazole 质量规格：HPLC>98%
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4二 DLCloprostenol sodium 质量规格：>98.5%,USP34
蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)说明书CAPG2/NCAPG2染色体相关蛋白2抗体小鼠粘蛋白/粘素5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒4424457
APRIN/PDS5B雄激素诱导增抑制蛋白抗体小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒
REC8减数分裂重组蛋白家族REC8抗体小鼠血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA试剂盒21256188
SA1/Nuclearproteinstromalantigen1粘结蛋白SA1抗体小鼠角化细胞内分泌子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒604751
SA2粘结蛋白SA2抗体小鼠活化素A(ACVA)ELISA试剂盒28721075
phosphoREC8(Ser251)化减数分裂重组蛋白家族REC8抗体小鼠抗状腺过化物酶抗体(TPOAb)ELISA试剂盒
SMC2染色体结构维持蛋白2抗体小鼠脑源性神经营养子(BDNF)ELISA试剂盒
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。