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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
21
- 英文名:
Apoptosis Inducers Kit
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
200次
1、细胞凋亡阳性对照试剂盒说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:细胞凋亡阳性对照试剂盒说明书
英文名称:Apoptosis Inducers Kit
产品规格:200次
发货周期:1~3天
本试剂盒含有两种不同的细胞凋亡诱导试剂,试剂A和试剂B。细胞凋亡诱导试剂A(Apopida)和试剂B(Apobid)分别可以诱导Hela、HEK293、CHO、COS等常见细胞的细胞凋亡。
由于细胞凋亡的诱导具有细胞特异性,细胞凋亡的机制也具有一定的细胞特异性,尽管细胞凋亡诱导试剂A和试剂B可以诱导常见的一些细胞的细胞凋亡,但是我们无法保证这两种试剂可以诱导任何一种细胞发生凋亡。细胞凋亡诱导试剂A和试剂B相互补充,可以诱导更多种类的细胞产生凋亡。本试剂盒至少可用于检测200个样品。
试剂盒组份
细胞凋亡诱导试剂A——————200μl
细胞凋亡诱导试剂B——————200μl
注意事项对于不同的细胞,需要摸索细胞凋亡诱导试剂的不同浓度和诱导时间。
储存条件-20℃,有效期一年。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
槐定碱亚油酸/十八碳-9,12-二烯酸/(Z,Z)-9,12-十八烷二烯酸/顺,顺-9,12-十八碳二烯酸/亚麻油酸/十八碳-9,12,15-三烯酸/亚麻酸/Linoleic acid
7-异氧基异黄酮矿物油/石蜡油/体石蜡/白矿油/白油/白色矿物油/矿脂/凡士林油/Mineral oil/Paraffin oil
单双甘油脂肪酸脂α-甘油磷酸镁盐/DL-α-甘油磷酸镁盐/甘油磷酸镁/甘油磷酸酯镁盐/DL-α-Glycerol phosphate magnesium salt hydrate
聚氧烯甘油GPα-甘油磷酸二钠/α-甘油磷酸钠/DL-α-甘油磷酸钠/α-Glycerophosphate disodium salt hexahydrate
高良姜素N,N-二基酰胺/二基酰胺/N,N-Diethylformamide
N-(2',6'-二苯基)-2-啶酰胺二胺盐酸盐/盐酸二胺/盐酸氨基二烷/二基化铵/N-基胺盐酸盐/Diethylamine hydrochloride
DL-薄荷醇二二胺/胍/双胺/二聚氨基/二聚/Dicyandiamide
香叶木素2,6-二醌-4-亚胺/2,6-二醌亚胺/2,6-双酰亚胺/2,6-二-4-酰亚胺/亚胺基二醌/2,6-二-4-(亚胺)-2,5-环己二烯-1-酮/2,6-Dichloroquinone chlorimide
锶1,1-二蒽醌亚胺/二蒽亚胺/1,1′-联蒽醌亚胺/1,1′-Dianthrimide
β-烟酰胺单核苷酸胺硫酸盐/硫酸胺/胺化硫酸/Benzidine sulfate
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