- ￥1388
- 雅酶
- CX001
- 2025年12月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
2500次
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
本产品常温运输；2~8℃避光保存，保质期12个月；在-20℃条件可以贮存更久。
货号规格
goodCX001SLM 1 mL(100次)
goodCX001MLS 5 mL(500次)
goodCX001LMS 5 mL×5(2,500次)
goodCX001LMS 5 mL×20(10,000次)
产品简介
good本试剂盒可以对细胞增殖和细胞毒性进行快速、高灵敏度的检测，它的核心成分为一种水溶性四唑盐，在电子耦合试剂存在的情况下，这种四唑盐能够被线粒体内的脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性甲臜染料。颜色越深，说明细胞增殖得越多越快，反之，则说明细胞毒性越大。对于相同的细胞，甲臜染料颜色的深浅与活细胞数目呈线性相关。
操作步骤
good◈ 细胞活性检测
good◈ 1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱预培养24 h(在37℃，5% CO2的条件下)；
good◈ 1. 注意：具体每孔所需的细胞数目，需根据细胞大小及增殖速度等因素来决定。
good◈ 2. 每孔加入10 μL的CCK-8溶液(避免在孔中生成气泡，以免影响OD值的读数)；
good◈ 3. 将培养板置于培养箱内孵育1~4 h；
good◈ 4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度；
good◈ 5. 如果暂时不测定OD值，可向每孔中加入10 μL 0.1 M HCl溶液或者1%(W/V)SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 h内吸光度不会发生变化。
good◈ 细胞增殖-毒性检测
good◈ 1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱预培养24 h(在37℃，5% CO2的条件下)；
good◈ 1. 注意：具体每孔所需的细胞数目，需根据细胞大小及增殖速度等因素来决定。
good◈ 2. 向培养板加入10 μL不同浓度的待测物质；
good◈ 3. 将培养板置于培养箱内孵育适当的时长(例如：6，12，24或48 h)；
good◈ 4. 每孔加入10 μL的CCK-8溶液(避免加入时在孔中产生气泡，以免影响OD值的读数)；
good◈ 5. 将培养板置于培养箱内孵育1~4 h；
good◈ 6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度；
good◈ 7. 如果暂时不测定OD值，可向每孔中加入10 μL 0.1 M HCl溶液或者1%(W/V)SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 h内吸光度不会发生变化。
good◈ 1. 注意：如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去除药物的影响。当然如果药物影响比较小，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
good◈ 标准曲线制作
good◈ 1. 使用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；
good◈ 2. 按比例(例如：1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3~5个细胞浓度梯度，每组3~6个复孔；
good◈ 3. 接种后培养2~4 h使细胞贴壁，然后加入CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间)。
注意事项
good1. 初次实验时，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间；
good2. 若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化或pH发生变化，建议更换新鲜的培养基后再加入CCK-8试剂。含有酚红的培养基不影响本试剂盒做细胞活性的测定；
good3. 如果样品为高浑浊度的细胞悬液，建议设定600 nm(或600 nm以上)作为参比波长，扣除参比波长的OD值即可；
good4. CCK-8试剂对细胞的毒性极低，经CCK-8法检测后的细胞仍然可正常生长，但为避免CCK-8试剂可能对后续检测造成影响，不推荐将CCK-8试剂孵育过的细胞用于其它实验；
good5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
good6. 本产品仅限科研使用。
相关论文
goodYU, Qiang, et al. PPARγ/NF‐κB and TGF‐β1/Smad pathway are involved in the anti‐fibrotic effects of levo‐tetrahydropalmatine on liver fibrosis. Journal of cellular and molecular medicine, 2021, 25.3: 1645-1660.（IF 5.310）
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文献和实验简介 细胞增殖/细胞毒性测定是涉及培养细胞的研究中最常用的测试之一。 其是检查用于治疗的药物浓度的基本初步测试，也是确定各种研究领域（如肿瘤学和细胞死亡）药物疗效和安全性的非常重要的测试。 传统上，WST-8 或 ATP 检测（使用代谢活性作为指标）和 BrdU 或胸腺嘧啶核苷检测（使用 DNA 合成水平作为指标）已用于细胞生长特性的定量评估。 尽管这些检测由于其简易性和吞吐量而对我们有益，但这些检测都是间接评估方法，因此结果可能与实际细胞数无关。 在许多情况下，这些检测是终点评估，有时会
一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
孔中加入配制好的梯度药物并继续进行实时动态检测， 即可获得化合物介导的细胞效应曲线及不同时间段IC50值。 四、实验结果实例 典型的利用RTCA技术获得的细胞增殖实验检测结果： 利用RTCA技术获得的典型的细胞毒性实验检测结果： 五、与传统方法（MTT）对比优势 1、实验操作简单，步骤少，人为误差小。 2、采用无标记方法，不存在标记效率问题，并且对细胞无损伤，细胞在最接近生理状态下进行检测，结果准确度高。 3、实验结果客观，重复性好，不需设置重复孔（实验
