β-Amyloid ELISA试剂盒

β-Amyloid ELISA 试剂盒

——定量检测 Aβ40/Aβ42

 

 

　　阿尔茨海默症（Alzheimer's Disease, AD），俗称老年痴呆症，其特征是在大脑神经细胞中存在老年斑（Senile Plaques，SPs） 和神经元纤维缠结（Neuro Fibrillary Tangles，NFT），老年斑的主要组成蛋白是 β- 淀粉样多肽（Amyloid Peptide，Aβ）40 和 42（43），Aβ42 比 Aβ40 更容易发生聚集。因此，蛋白样多肽的聚集开始于 Aβ42 而不是 Aβ40。出现了 Aβ42 而没有出现 Aβ40 是阿 尔茨海默症的早期特征；出现了 Aβ40，尤其是在成熟老年斑的中心部分出现则代表进入阿尔茨海默症的晚期阶段。

　　本产品可检测与阿尔茨海默病相关的淀粉样蛋白β 蛋白质（1-40）以及淀粉样蛋白β 蛋白质（1-42）的高灵敏度 ELISA 试剂盒。与以往试剂盒相比较，检测灵敏度提高约 10 倍，检测范围在 0.1~20.0（pmol/L）。

　　另外，因为以往产品同样标志抗体Fab’化，非特异性结合降低。由于运用的是武田药品工业株式会社开发的特异性非常高的单克隆抗体，不仅是组织提取液、培养上清液、脑脊髓液，而且以前检测较困难的血浆中 Aβ40 以及 Aβ42 亦可高灵敏度检测。

 

◆特点

●  可检测多种样品类型：脑组织样品，培养基上清样品，脑脊髓液样品， 血浆样品等

●  特异性极强的抗体，避免非特异性结合

　 BAN50：Ａβ肽Ｎ末端１-16 特异性

　 BNT77：Aβ11-28特异性

 　BA27：Aβ40 Ｃ末端特异性

　 BC05：Aβ42 Ｃ末端特异性

●  极高的灵敏度，可检测至 pmol 级含量

●  使用此产品的文章已在 Science、Biochemistry、Neuron 等多家国际知名刊物发表

 

产品	Wako 产品	A 产品	对比优势
产品名称	Human/Rat beta (40) ELISA Kit Wako	Human 40 ELISA Kit
检测原理	夹心法 ELISA	夹心法 ELISA
使用的抗体	包被的抗体，HRP标记的检测抗体	包被的抗体，检测抗体，HRP标记的识别检测抗体的抗体	Wako产品检测需２个抗体，而A产品需３个抗体
检测物种	人，小鼠，大鼠	人	Wako产品可检测物种多于A产品
检测范围	1.0~100 pmol/L	<100 pmol/L
检测灵敏度	0.25 pmol/L	1.25 pmol/L	Wako 产品灵敏度更高
检测样品	脑组织样品，培养基上清样品， 脑脊髓液样品，血浆样品	培养基上清，组织匀浆液，脑脊 髓液

 

 ◆检测原理

 

◆试剂盒种类

β-淀粉样蛋白ELISA试剂盒   Wako	使用Fab'片段抗体的试剂盒，低非特异性结合。
β-淀粉样蛋白ELISA试剂盒 Wako Ⅱ	使用F(ab’)2片段抗体的试剂盒，抗原抗体反应稳定性得到提高。
β-淀粉样蛋白ELISA试剂盒Wako，高灵敏度	与常规产品相比提高约10倍灵敏度的试剂盒。使用Fab'片段抗体，低非特异性结合。

 

试剂盒组成

抗体包被的微孔板                          1 块 标准溶液                                        2mL×2支   标准稀释液                                     2 mL×2支 清洗液（20x）                               50 mL×1支 HRP标记抗体溶液                          12 mL×1支 TMB溶液                                        12 mL×1支 终止液                                            12 mL×1支 密封件                                            3支

 

◆实验流程

① 加入100 μL 的标准品和样品，在４度冰箱中密封过夜。  ↓ ② 加入 HRP 标记的抗体溶液，在４度冰箱中孵育。 ↓ ③ 加入100 μL TMB 溶液室温孵育 30 分钟，避光，密封盖子，进行显色反应。 ↓ ④ 加入100 μL 终止液，测 OD 450 nm值。

 

◆案例

案例1. 人、小鼠血浆的测定

　　使用 EDTA2K 真空采血管采血，置于 5000 g、4℃、离心15分钟，分离血浆，使用之前存放于-80℃。

　　用试剂盒附带的标准稀释液，４倍样本稀释后测定。

　　（*Aβ（1-40）以及Aβ（x-40）的测定使用人β淀粉样蛋白（1-40）ELISA试剂盒 WakoⅡ（产品编号：298-64601）以及人/大鼠β淀粉样蛋白（40）ELISA试剂盒 WakoⅡ（产品编号：294-64701）。

 

案例2. 小鼠脑组织的测定

　　用 2 mL 的 Tris 盐水提取12月龄 APP 转基因小鼠（J20）的脑半球，使用之前置于-20℃保存。

　　用试剂盒附带的标准稀释液，２倍样本稀释后测定。

　　除了转基因（tg）小鼠，也可测定野生型（wt）小鼠的微量 Aβ 。

（数据提供：东京大学大学院药学研究科 临床药学教室 岩坪教授 桥本助手）

 

标准曲线

　　用试剂盒附带的标准溶液制作标准曲线。结果显示，在 0.1~20.0（pmol/L）范围内，接近于直线。

 

加标回收测试

　　向血浆中分别加入５、10、20（pmol/L），４倍稀释后记录测定时的回收率（％）（测定值/理论值）。基本显示较高的回收率。

 

稀释实验

　　将Ａ、Ｃ、Ｅ的正常人血浆稀释２~16 倍后求稀释曲线。结果显示，特别是人/大鼠系列获得了良好的稀释曲线。

 

◆Aβ相关ELISA试剂盒选择指南

产品编号	产品名称	抗体克隆编号		可检测的Aβ								检测范围 （pmol/L）
		捕获	检测	人Aβ (1-40)	人Aβ (1-42)	大鼠 （小鼠） Aβ(1-40)	大鼠 （小鼠） Aβ(1-42)	Aβ  (x-40)※1	Aβ (x-42)※1	人Aβ 寡聚 (≦8 mer)	人Aβ 寡聚 (≧9 mer)	1.0-100
292-62301	人β淀粉样蛋白(1-40)ELISA 试剂盒   Wako	BAN50	BA27(Fab')	+	-	-	-	-	-	※4	※4	1.0-100
298-64601	人β淀粉样蛋白(1-40)ELISA 试剂盒 Wako II※2	BAN50	BA27(F[ab']2)	+	-	-	-	-	-	※4	※4	1.0-100
298-62401	人β淀粉样蛋白(1-42)ELISA 试剂盒 Wako	BAN50	BC05(Fab')	-	+	-	-	-	-	※4	※4	1.0   - 100
296-64401	人β淀粉样蛋白(1-42)ELISA 试剂盒Wako，高灵敏度	BAN50	BC05(Fab')	-	+	-	-	-	-	※4	※4	0.1-   20
294-62501	人/鼠β淀粉样蛋白(40)ELISA 试剂盒Wako	BNT77	BA27(Fab')	+	-	+	-	+	-	※4	※4	1.0   - 100
294-64701	人/鼠β淀粉样蛋白(40)ELISA 试剂盒Wako II※3	BNT77	BA27(F[ab']2)	+	-	+	-	+	-	※4	※4	1.0   - 100
290-62601	人/鼠β淀粉样蛋白(42)ELISA 试剂盒 Wako	BNT77	BC05(Fab')	-	+	-	+	-	+	※4	※4	1.0   - 100
292-64501	人/鼠β淀粉样蛋白(42)ELISA试剂盒Wako，高灵敏度	BNT77	BC05(Fab')	-	+	-	+	-	+	※4	※4	0.1   - 20
290-82001	高分子β淀粉样蛋白寡聚体 ELISA试剂盒Wako Ver.2	BAN50	BAN50	-	-	-	-	-	-	-	+	0.16-40 (血浆·血清) ※5 0.41-100 （脑脊液）※5

※1  Aβ(x-40)、Aβ(x-42)为N末端被切断或修饰的Aβ肽。

※2  与292-62301比较抗原抗体反应相对稳定

※3  与294-62501比较抗原抗体反应相对稳定

※4  未验证

※5  换算为MAP16肽

 

◆适用样品

产品编号	产品名称	脑脊液	脑组织提取液	血清	血浆	细胞培养上清
292-62301	人β淀粉样蛋白(1-40)ELISA试剂盒Wako	+	+	+	+	+
298-64601	人β淀粉样蛋白(1-40)ELISA试剂盒Wako II※2	+	+	+	+	+
298-62401	人β淀粉样蛋白(1-42)ELISA试剂盒Wako	+	+	+※6	+	+
296-64401	人β淀粉样蛋白(1-42)ELISA试剂盒Wako，高灵敏度	+	+	+※6	+	+
294-62501	人/鼠β淀粉样蛋白(40)ELISA试剂盒Wako	+	+	+	+	+
294-64701	人/鼠β淀粉样蛋白(40)ELISA试剂盒Wako II※3	+	+	+	+	+
290-62601	人/鼠β淀粉样蛋白(42)ELISA试剂盒Wako	+	+	+※6	+	+
292-64501	人/鼠β淀粉样蛋白(42)ELISA试剂盒Wako，高灵敏度	+	+	+※6	+	+
290-82001	高分子β淀粉样蛋白寡聚体ELISA试剂盒Wako Ver.2	+	+	+	+	※4

※2  与292-62301比较抗原抗体反应相对稳定

※3  与294-62501比较抗原抗体反应相对稳定

※4  未验证

※6  可检测，但与血浆相比检测数值容易随时间降低

 

常见问题

Q1：标准品溶液的OD值过低，导致无法绘制校准曲线。这是如何发生的？

A1：有可能是实际洗板时间过长。尝试在２-３分钟内完成洗板操作。请在室温下使用清洗液。如果无法使用洗板机，首先轻轻地倒出孔内的溶液（注意避免孔间交叉污染），使用洗瓶等向孔内加入清洗液，随后再次去除清洗液。重复该操作５次。在此种情况下，清洗的总时间也不要超过２-３分钟。

 

Q2：标准溶液中的Aβ肽是否会聚集？

A2：标准溶液中的多肽不会聚集。可在冰箱内稳定保存。

 

Q3：测量值不一致。可能的原因？

A3：在清洗过程中，不同孔之间浸泡的时间（例如加入清洗液的用时）不同可能会导致结果不一致。使用移液器清洗的手动操作特别容易造成时间偏差。为了确保每孔的浸泡时间尽可能接近，可以尝试这种方式进行清洗操作，如第一次清洗时，从孔板的右侧开始，第二次清洗时从左侧开始。

 

Q4：保存方法

A4：人体样品，如脑组织和脑脊液请冷冻保存在冰箱中，但某些样品在此条件下保存后会发生测量值降低的情况。如果Aβ的浓度过低，则应当避免反复冻融样品。对于细胞培养上清，加入 0.2% 牛血清白蛋白和 0.075% CHAPS（浓度为两者的终浓度）可以降低对容器壁的吸附从而减少损失，再放入冰箱冷冻保存。

 

Q5：可以测量血清样品吗？

A5：可行。但不建议这样做，因为血清的测量值通常低于同时采血的血浆的测量值。血清样品冷藏保存时也容易导致更大程度的数值变化。

 

Q6：对于血浆样品使用何种抗凝剂？

A6：我们推荐 EDTA2K。EDTA2Na 和肝素也可使用。

 

Q7：除了所示浓度之外，可以将标准品稀释成其他浓度吗？

A7：没有问题。可以根据实验体系，制备一系列适合您的稀释浓度。

 

Q8：是否可以使用除对数以外的其他类型校准曲线？

A8：没有问题。

 

Q9：建议样品进行复孔（n=2）测定，标准品是否也有必要进行复孔测定？

A9：建议标准品也进行复孔（ｎ=２）测定，但如果检测样品较多，请根据实验需求进行安排，如ｎ=１。

 

Q10：开封后的试剂应当如何保存？

A10：将微孔板放回铝箔袋内并放入干燥剂，可以冷藏在冰箱内稳定保存。

 

◆产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
292-62301	Human β Amyloid(1-40) ELISA Kit  Wako  人β 淀粉样蛋白(1-40)ELISA试剂盒 Wako	96 tests	for Immunochemistry
298-62401	Human β Amyloid(1-42) ELISA Kit Wako 人 β淀粉样蛋白(1-42)ELISA试剂盒 Wako	96 tests	for Immunochemistry
296-64401	Human β Amyloid(1-42) ELISA Kit Wako, High Sensitive  人 β淀粉样蛋白(1-42)ELISA试剂盒 Wako ，高灵敏度	96 tests	for Immunochemistry
298-64601	Human β Amyloid(1-40)ELISA Kit Wako Ⅱ 人 β淀粉样蛋白(1-40)ELISA试剂盒Wako II	96 tests	for Immunochemistry
294-62501	Human/Rat  β Amyloid(40)ELISA Kit Wako 人/ β淀粉样蛋白(40)ELISA试剂盒 Wako	96 tests	for Immunochemistry
290-62601	Human/Rat  β Amyloid(42)ELISA Kit Wako 人/鼠β淀粉样蛋白(42)ELISA试剂盒 Wako	96 tests	for Immunochemistry
292-64501	Human/Rat  β Amyloid(42) ELISA Kit Wako, High Sensitive 人/鼠β淀粉样蛋白(42)ELISA试剂盒 Wako ，高灵敏度	96 tests	for Immunochemistry
294-64701	Human/Rat β Amyloid(40) ELISA Kit Wako II 人/鼠β淀粉样蛋白(40)ELISA试剂盒Wako II	96 tests	for Immunochemistry
290-82001	High Molecular Amyloid β Oligomer ELISA Kit Wako Ver.2 高分子β淀粉样蛋白寡聚体ELISA试剂盒Wako Ver.2	96 tests	for Immunochemistry