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- 2025年07月10日
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22
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详见说明书
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上海邦景
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低温冷藏
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(测红细胞)100管/50样|(测红细胞)50管/25样|(测组织、普通细胞)100管/50样|(测组织、普通细胞)50管/25样
产品名称：超微量Ca2+Mg2+-ATP酶测定试剂盒(比色法)说明
英文名称：Ca2+Mg2+-ATPase assay kit
产品规格：(测红细胞)100管/50样|(测红细胞)50管/25样|(测组织、普通细胞)100管/50样|(测组织、普通细胞)50管/25样
发货周期：1～3天
检测指标：超微量Ca2+Mg2+-ATP酶
本试剂盒可测各种动物的红细胞、全血等样本中Ca2+Mg2+-ATP酶活性。ATP酶存在与组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用，机体在缺氧及一些疾病状态下，此酶活力发生一系列改变，
注意事项：
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测，反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水（1:9）稀释至 1×备用。
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
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文献和实验四唑盐（MTT）：噻唑蓝 原理：MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法.活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与活细胞数成正比。 优点：简单快速、灵敏、经济 缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。应用：新药筛选、细胞毒牲试验、肿瘤
songdianwei 你好！最近用R&D公司的CAMP测定试剂盒测细胞内CAMP的浓度，但是细胞一直裂解不好！我是按照试剂盒的说明书上操作的，我反复冻融了四五次，裂解效果还是不理想！做出来的结果根本没有梯度！谢谢各位大侠了！急需帮忙！ sunopal_5200 请问您做出来了吗？我也买了RD试剂盒，预实验都不理想，值太低。楼主做时加IBMX了吗？ zwh2004 我08做过cAMP检测
严重，因此比色杯最难以清洗干净，且在实际工作中难以判断该比色杯上一测试的项目；试剂针吸量较大，亦难以清洗干净。 二、试剂间化学污染的类型 试剂间化学污染的原因很多，常见的类型主要有以下几种： １.试剂成分的直接污染：上一测定试剂中含有下一测定所需要测定的物质，直接干扰下一检测的测定结果。如：AMY试剂中含有较高浓度的Ca2+ ；ALP（IFCC法）、CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）、CO2（PEPC法）、AMY（EPS法）、TG等试剂中含有Mg2+；GLU（氧化酶法）、TP、ACP
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