Hoechst 33342/PI双染试剂盒规格

实验报告：
一、Hoechst 33342/PI双染试剂盒规格分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：Hoechst 33342/PI双染试剂盒规格
英文名称：Apoptotic Cell Hoechst 33342/PI Detection Kit
产品规格：100T
发货周期：1～3天
荧光染料Hoechst33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。而PI染料是不能进入细胞膜完整的正常细胞和凋亡细胞中，即活细胞对PI染料拒染，而坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被PI染料染色。
用Hoechst33342结合PI染料对凋亡细胞进行双染色，就可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst33342+/PI++）
储存2-8℃，避光，有效期一年。
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
 1--1H-唑-3-Nucleo Screen Blot (16 strips = unit)
 1--1H-唑-5-Nucleo Screen Blot (8 strips = unit)
 3--6-嗪-2-Occult Combo Detect (Haemo-Haptoglobin Rap-test)
 2--6--4--[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-5-Occult Detect
 3,5-二-4-Occult Detect Advanced Rapid Test (cassette) (min 10 kits)
 3H-1,2,3-三唑并[4,5-C]啶Occult Detect Eco-Pro Rapid Test (dipstick) (min 10 kits)
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 1,3,3-三吲哚-奈谔嗪Opiate (Morphine) (cassette) (drug of abuse) (FDA)
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Hoechst 33342/PI双染试剂盒规格川楝素(标准品）英文名(EN)Cobalt(II) sulfate hydrate特价促销  规格(SP)5G
川芎嗪英文名(EN)Cobalt (Ⅲ) acetylacetonate特价促销  规格(SP)25G
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川续断皂苷VI；木通皂苷D（标准品）英文名(EN)Cobalt chloride hexahydrate特价促销  规格(SP)50G
川续断皂苷（标准品）英文名(EN)Cobalt(II) acetate tetrahydrate特价促销  规格(SP)10G
穿心莲内英文名(EN)Cobalt sulfate heptahydrate特价促销  规格(SP)25G
穿心莲内（标准品）英文名(EN)Cobalt nitrate hexahydrate特价促销  规格(SP)25G
垂体苷环化激活肽7（67），，鸡，小鼠，猪，大鼠英文名(EN)Cobaltous naphthenate特价促销  规格(SP)250G
垂体苷环化激活肽7，，小鼠，绵羊，猪，大鼠英文名(EN)Cobalt(II)oxide特价促销  规格(SP)25G
垂体苷环化激活肽8（168），，鸡，小鼠，绵羊，猪，大鼠英文名(EN)Cobalt(II) oxalate dihydrate特价促销  规格(SP)100G
垂体苷环化激活肽相关肽（19），大鼠英文名(EN)Cobalt carbonate特价促销  规格(SP)250G
春雷素;春日素; 克死英文名(EN)Nickel acetylacetonate hydrate特价促销  规格(SP)5G
春雷素盐盐（标准品）英文名(EN)Nickel bromide特价促销  规格(SP)25G
水(HPLC grade)英文名(EN)[1,3Bis(diphenylphosphino)propane]nic...特价促销  规格(SP)1G
雌二,β雌二英文名(EN)[1,2Bis(diphenylphosphino)ethane]dich...特价促销  规格(SP)1G
雌二,β雌二（标准品）英文名(EN)[1,1'Bis(diphenylphosphino)ferrocene]...特价促销  规格(SP)1G
雌/雌英文名(EN)Iron nickel oxide特价促销  规格(SP)25G
雌/雌（标准品）英文名(EN)Nickel(II) oxalate dihydrate特价促销  规格(SP)1G
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。