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细胞活力检测试剂盒(化学发光法)价格

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  • 上海研生
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  • 2025年07月11日
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    • 英文名

      Luminescent Cell Viability Assay Kit

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海研生

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

      100次|500次

    中文名称:细胞活力检测试剂盒(化学发光法)价格
    英文名称:Luminescent Cell Viability Assay Kit
    产品规格:100次|500次
    发货周期:1~3天

    本试剂盒是一种通过化学发光法测定细胞内ATP含量从而来定量检测活细胞数目的试剂盒。本试剂盒的性能和用途与Promega公司的同类产品基本相同,对于相同的细胞样品本试剂盒的发光效果更强一些。
    本试剂盒比常见的MTT、alamarBlue、Calcein-AM、WST-1、CCK-8等其它细胞活力测定方法更加简单快捷。只需把试剂盒提供的检测试剂与培养细胞等体积混合,反应10分钟后即可进行化学发光检测。无需洗涤细胞,也无需更换或去除培养液。并且化学发光非常稳定,在反应开始后的10分钟内无显著变化,30分钟内的下降不超过10%。
    本试剂盒不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量筛选检测。
    本试剂盒线性范围广,检测灵敏度高。用96孔板进行检测时,本试剂盒在0-50,000个细胞/孔的细胞密度范围内有良好的检测效果,并且在仅有几百个细胞时仍有良好的线性关系。当细胞数量仅为50个/孔时,发光强度可达空白孔的5倍左右。
    ATP,作为最重要的能量分子,在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP是细胞新陈代谢的一个重要指标,也是具有代谢活性细胞的重要标志性分子,并和活细胞数目成良好的线性关系。因此,ATP含量能很好地反应活细胞的数目,即本试剂盒可以通过测定ATP含量来进行细胞计数或检测细胞活力。
    本试剂盒通过ATP检测细胞活力的原理参考下图。借助ATP依赖的萤光素酶催化的萤光素发光反应,ATP可以通过测定化学发光来进行定量。由于ATP含量能很好地反映活细胞的数目,而ATP含量和发光强度成正比,这样就可以简单地通过化学发光强度来计算出细胞活力或细胞数目。
    细胞活力检测试剂盒(化学发光法)检测ATP的原理图
    对于96孔板,我们推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒可以进行100次检测。对于384孔板,我们推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但细胞培养液和检测试剂体积的比例必须为11。
    储存条件室温,有效期2年。
    实验报告:
    一、分离与培养:
        1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
        2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
        3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
        4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
        5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
    二、免疫荧光鉴定:
        1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
        2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
        3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
        4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
        5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
        6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

    产品细节图片1培养操作步骤:
    1.细胞活力检测试剂盒(化学发光法)价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 
    2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 
    3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 
    4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 
    5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
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    注意事项:
          尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
          如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
          染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
          如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
          荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
          用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
          需自备PBS。
          本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
          为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


     

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