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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
500T
实验报告：
一、CFSE细胞增殖与毒性检测试剂盒价格分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：CFSE细胞增殖与毒性检测试剂盒价格
英文名称：
产品规格：500T
发货周期：1～3天
荧光染料CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。CFSE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFSE在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的CFSE的AM部位能被细胞内酯酶水解发出绿色荧光。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。
在细胞分裂增殖过程中，CFSE的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。CFSE标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪(FL1通道)根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次(1/2的荧光强度)，二次(1/4的荧光强度)，三次(1/8的荧光强度)，以及更多分裂次数的细胞。CFSE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFSE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。
CFSE标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。CFSE毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。
CFSE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测。
CFSE标记细胞呈绿色荧光，荧光波长λex=496nm,λem=516nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为516nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1detectionchanel。CFSE标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。
储存条件CFSE须-20℃避光保存，注意防潮。
有效期六个月。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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对己溴异烟/4-啶羧/啶-4-羧/4-啶羟/啶-4-羟/4-噼啉/4-啶/COA
3-噻吩-2-羧维生素B3/烟/菸/3-啶羧/啶-3-羧/3-噼啉/啶-3-/3-啶羟/啶-3-羟/3-噼啉/尼克/尼古/-3/素/VB3
4-唑并[3,4-d]嘧啶5-核黄素盐二水物/核黄素-5-盐二水物/核黄素/维生素B2二水物/黄素单核苷二水物/核黄素-5’-酯二水物/5’-核黄素二水物/FMN-Na
碳盐5-核黄素盐/核黄素-5-盐/核黄素/维生素B2/黄素单核苷/核黄素-5’-酯/5’-核黄素/核黄素-5-(二酯)单盐/FMN-Na
4--2-肉桂维生素A/维生素A/维生素A油酯/维生素A酯/视黄盐/维他命A/视黄醇酯/抗感染性维生素酯/Vitamin A acetate
5-并[C][1,2,5]恶二唑维生素A棕榈酯/维生素A十六酯/视黄醇棕榈酯/Vitamin A palmitate
5-并[C][1,2,5]恶二唑底物稳定剂CCD
1-(3-)-4-嗪酶反应催化剂PCD
N-苄酶复合稳定剂
2,5-二溴复合酶保护剂
CFSE细胞增殖与毒性检测试剂盒价格Dimethylbisdiphenylphosphinoxanthene4,5双二9,9二蒽161265038
Semixylenol orange半二橙19329670
Chromic nitrate13548384
PipN,N'bis(2hydroxypropanesulphonic acid) disodium salt嗪N,N双(2羟)二108321079
D()Asparagine monohydrateD天冬酰一水物5794241
4Methylphenethylamine对3261629
GLYCOCHENODEOXYCHOLIC ACID SODIUM SALT甘鹅脱胆16564435
SODIUM CARBONATE, MONOHYDRATE一水碳1486118
ZINC STANNATE锡12036372
Platinum bis(acetylacetonate)酰铂(II)15170577
N,NDIMETHYL3NITROANILINEN,N二3619318
Stannous pyrophosphate焦亚锡15578264
Cichoric acid菊苣70831560
3PHENYL3METHYLTHIOANILINE3151386720
4Methyl2oxovaleric acid42816660
维拉帕米 订购|咨询 规格 50mg
苦杏仁 订购|咨询 规格 2.5g
藏木香 订购|咨询 规格 1g
生脉提取物 订购|咨询 规格 10mg
莪术 订购|咨询 规格 20mg
青霉二物 订购|咨询 规格 30mg/支
绒膜促性腺激素(hCG) 订购|咨询 规格 3支/套，0.5ml/支
石斛(铁皮石斛) 订购|咨询 规格 1.0g
瓜蒌皮(双边栝楼) 订购|咨询 规格 2.0g
蛇床子素 订购|咨询 规格 20mg
唑 19387918 订购|咨询 规格 100mg
荷叶 475832 订购|咨询 规格 20mg
络石苷 订购|咨询 规格 20mg/支
吲哚布芬 订购|咨询 规格 100mg
地骨皮 订购|咨询 规格 1g
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
一、CFSE细胞增殖与毒性检测试剂盒价格分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
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二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
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3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
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5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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文献和实验相关实验
简介 细胞增殖/细胞毒性测定是涉及培养细胞的研究中最常用的测试之一。 其是检查用于治疗的药物浓度的基本初步测试，也是确定各种研究领域（如肿瘤学和细胞死亡）药物疗效和安全性的非常重要的测试。 传统上，WST-8 或 ATP 检测（使用代谢活性作为指标）和 BrdU 或胸腺嘧啶核苷检测（使用 DNA 合成水平作为指标）已用于细胞生长特性的定量评估。 尽管这些检测由于其简易性和吞吐量而对我们有益，但这些检测都是间接评估方法，因此结果可能与实际细胞数无关。 在许多情况下，这些检测是终点评估，有时会
一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
标记10min。 离心洗涤两次后，用适量的完全培养液重悬细胞。CFSE的浓度国外报道从0.5uM~20uM都有，建议终浓度为2.5-5uM。浓度太低，细胞标记的荧光强度不够，太高了对细胞有毒性，且影响细胞增殖。标记孵育时要经常摇匀。
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