DNase I 牛胰腺脱氧核糖核酸酶I Deoxyribon

脱氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一种发现于多种细胞和组织的核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。最佳的工作范围是pH7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co 2+，Mn2+，Zn2+等激活。5 mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。

本品来自牛胰腺，由四种色谱区分的组分A，B，C，D构成，摩尔比为4:1:1，而D组分非常少。分子生物学实验中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以含氯化钙的冻干粉形式供应，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。

产品信息

组分信息

产品性质

备注：产品规格中的“U”等同于“Kunitz unit”

储存条件

Part Ⅰ组分-25~-15℃保存，有效期2年；

Part Ⅱ组分室温保存，有效期2年；

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2. 本产品仅作科研用途！

DNase Ⅰ储存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl₂，0.1 mM PMSF，50%甘油。

注：1、试剂盒中配有DNaseⅠ储存溶液的配制组分Buffer A（成分为20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl₂，50%甘油）和0.1 mM PMSF。

2、DNaseⅠ储存溶液配制：使用前，在Buffer I中加入0.1 M PMSF使其终浓度为0.1 mM即可，如1 mL 的Buffer I中加入1 μL 0.1 M PMSF。

3、在DNaseⅠ酶促反应中，需要加入MgCl_2，具体使用方法参考以下“蛋白提取实验”。

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

使用方法（应用于蛋白提取实验，仅供参考）

1) DNase I工作液的配制：将DNase I粉末溶解于DNase I储存液中，使其浓度为2000 U/mL。

2）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I工作液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl₂。

3）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。

【注】：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca²⁺和Mg²⁺，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。