内质网绿色荧光探针(活细胞成像用)北京厂家

特别提示：包括内质网绿色荧光探针(活细胞成像用)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：内质网绿色荧光探针(活细胞成像用)
英文名称：ER-Tracker Green
产品货号：KM0046
产品规格：20μL|5×20μL

本品为ER-Tracker Green的DMSO储存液，浓度为1mM。用于活细胞内质网染色，建议工作浓度约为1μM，需根据实际情况做优化调整。按照说明书的标准步骤操作，活细胞染色后用甲醛等固定可保留部分染色效果。

ER-Tracker dyes是一系列细胞膜渗透性的活细胞染料，高度选择性结合内质网（ER）。不同于传统的内质网染料DiOC6(3)，该系列染料极少染色线粒体，且低浓度下染色无细胞毒性。使用提供的优化步骤对细胞染色和甲醛处理后，可以保留部分的活细胞染色特征。

ER-Tracker Green是一种药物荧光偶联物，即BODIPY FL标记的格列苯脲（BODIPY FL Glibenclamide）。格列本脲，又名优降糖（Glyburide），是一种磺酰脲类口服降糖药，用来调查胰岛素β细胞活性和胰岛素分泌，以及研究心肌细胞功能和心律失常。格列本脲能够结合内质网上突出的ATP敏感性钾通道（KATP）的磺脲类受体。格列本脲的药理学活性可能影响内质网功能。某些特定细胞上磺脲类受体的可变表达可能引起非内质网标记。BODIPY FL最大激发/发射波长~504/511nm，光谱特性类似于传统的FITC，与检测该染料的标准滤片兼容。

主要参数：
分子式：C37H42BClF2N6O6S
分子量：783.0952
外观：液体
Ex/Em：504/511nm(in methanol)
检测滤片：FITC
保存：≤-20oC避光干燥保存，至少6个月有效。

注意事项：
1．整个染色过程中需注意避光。
2．ER-Tracker Green（1mM）在4℃，冰浴等较低温度下会凝固而粘附在离心管官底、管壁或管盖内，可将置于25℃水浴温育片刻直至全部融解后使用。对于微量液体，每次使用前低速离心使得液体全部沉降至管底，再开盖使用。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法：
以下实验方案是根据牛肺动脉内皮细胞（BPAE）优化所得，且已验证适用于其他常规细胞系的染色。建议以下步骤仅作起始实验的参考，请根据具体的细胞类型和实际情况来优化标记条件。

一、试剂准备
ER-Tracker Green以1mM的DMSO储存液形式提供，使用前请将ER-Tracker Green从冰箱内取出，确保回温至室温或于25℃水浴温育直至完全融解，经短暂离心将所有溶液沉到管底。第一次使用将储存液根据单次用量分装，≤-20oC避光干燥保存。

二、细胞染色
1．制备染色工作液：将1mM ER-Tracker Green稀释至工作浓度，建议工作浓度~1μM。为了最小化染料过高引起的假象，建议使用能达到实验目的的最低浓度来完成染色。
注意：在含Ca2+/Mg2+的Hank’s平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg,Cat# KM0185-500ML）内进行染色可得到最佳结果。
2．细胞染色：对于贴壁细胞，吸除培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养基，并在荧光显微镜下观察细胞。如果细胞需要固定，请跳转到步骤三。

三、细胞固定(选做，固定只能保留部分荧光信号)
1．固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2min。
2．清洗和观察细胞：固定后，用合适缓冲液清洗2次，每次5min。之后可进一步染色或滴加抗荧光淬灭剂封片后观察。不建议进行透化处理，因用Triton X-100做透化处理会导致荧光信号消失。

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