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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Collagenase, Type II, powder
- 保质期:
切勿冻存,有效期24个月
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件:
长时间储存于4℃
- 规格:
1G
产品介绍
本公司胶原酶来源于进口原料,酶活性高,纯度高。本品为固体粉末状态。
胶原酶Ⅱ适用于脂肪、肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织细胞的分离。
外观为黑棕色粉末。
分子量68,000到125,000,
最适PH为6.3-8.8。
活性: 高于125 units/mg solid
胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸(X) 和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。
主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白 酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶,组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共 同作用。
使用说明:
胶原酶II 可以用 TESCA buffer (50 mM TES,0.36 mM 氯化钙,pH 7.4,37°C)配制成 1-2 mg/ml。
也可以用含钙镁的 PBS、含钙镁的 hanks 或不含血清的培养基配制。(配完后分装,避免反复冻融)。
活性说明:
1 个胶原消化单位(CDU):在 pH 7.4,37℃以及钙离子存在的条件下,以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。
1FALGPA 单位:在 pH 7.5、25℃以及钙离子存在的条件下,一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0μmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。 激活剂:Ca2+,最适合浓度为5 mM。
底物:不同类型的胶原是其天然底物,而一些合成的多肽也可以作为其底物,比如: N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 类胶原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎动物 胶原酶的底物。
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5-10 min后,吸取液体加入Loading Buffer,高温煮沸变性跑胶即可。 步骤2:37°C酶法解离 ·用无菌吸管将剪碎的组织悬液吸入15 mL或50 mL离心管中,加入预热好的胶原酶工作液(通常为组织体积的5-10倍,如0.1 g-0.5 g(约1个黄豆大小)的组织需加2-3 mL胶原酶)。 建议在胶原酶工作液中添加20-100 μg/mL DNase I,用于降解死细胞释放的粘稠 DNA,预防细胞抱团拉丝、堵塞滤网。 ·将离心管放入37°C恒温水浴摇床中进行温和振荡消化(转速建议控制
1.实验动物 产蛋期母鸡(动物实验中心购买),普通饲料喂养,自由进食进饮;实验前禁食12h 2.主要试剂及仪器 EDTA-2Na购自国药集团化学试剂有限公司;双抗购自Hyclone公司;M199培养基、胎牛血清及Ⅱ型胶原酶均购自美国Gibico 公司;CO2恒温培养箱购自美国Thermo公司 3.实验步骤 A. 翅下静脉注射2mL EDTA-2Na(W/V,2%)溶液处死母鸡,新洁尔灭消毒液浸泡消毒5min,打开腹腔,剪取整个卵巢,小心剥离卵泡(以8-15g为最佳),置于装有PBS
化应激或基质降解。 · 它适合与 qPCR、WB、免疫荧光、CCK-8、ROS、凋亡等实验组合使用。 · 它能把动物模型中的病理现象,进一步拆解到细胞功能和分子机制层面。 二、核心原理:先把软骨基质打开,再把细胞温和释放出来 软骨组织的特点是细胞少、基质多。软骨细胞被包埋在富含胶原和蛋白多糖的细胞外基质中,不像普通贴壁细胞那样轻轻一吹就能下来。 因此,小鼠原代软骨细胞提取的关键,是通过胰酶预处理和 II 型胶原酶消化,逐步松解组织结构,让细胞从基质里释放出来,同时尽量保留细胞
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