PCR产物及DNA片段纯化试剂盒

PCR产物及DNA片段纯化试剂盒

产品组分

 

货号	ZY1091 （50次）	ZY1092 （100次）	ZY1093 （200次）
溶液BD	20 ml	40 ml	80 ml
溶液PE	15 ml	15 ml×2	20 ml×3
溶液Eluent	2.5 ml	5 ml	10 ml
DNA纯化柱	50个	100个	200个
说明书	1份	1份	1份

 

● 溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。

● 溶液BD中含有变性剂，请不要直接接触皮肤。

● 上述产品组分均可单独购买，详见产品索引。

 

产品说明

本产品采用传统的硅胶柱膜吸附技术，用于从PCR或其他各种酶促反应液中纯化DNA片段（50 bp-10 kb）。其纯化原理是硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的DNA片段（高盐、低pH值），同时去除酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质，被吸附的DNA再在低盐、高pH值条件下被洗脱纯化。一次可回收30μg高纯度DNA片段，此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

 

 

质量控制
从PCR扩增产物中纯化50 bp和1,000 bp的DNA片段。

 

保存条件

室温保存2年。

 

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

●  溶液PE第一次使用前请按瓶上标签加入4倍体积的无水乙醇，即15 ml溶液PE中加入60 ml无水乙醇，20 ml溶液PE中加入80 ml无水乙醇，使用后立即盖紧盖子。

● 本试剂盒适用于无选择性的回收体系中所有的DNA 片段。如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，建议选择凝胶回收试剂盒。

● 本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。但如果DNA浓度小，或DNA初始量少，回收率将会偏低。

● 溶液Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含EDTA，其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等，不会影响后续试验。

● 为了保证回收效率，请不要使用未调整pH值的超纯水洗脱目的片段。

● 请严格按照操作步骤操作。

 

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  确定PCR反应液或其他酶促反应液的体积。将PCR反应液或其他酶促反应液转移至一个新的1.5 ml离心管中，向其中加入等体积溶液BD，混合均匀。

2  将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中，静置2min。

    ● 若溶液体积大于纯化柱容积（700 μl），可分两次加入。

3  12,000 rpm离心1min，弃滤液。

    ● 此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

4  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm, 离心1min，弃滤液。

    ● 溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。

    ● 此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱，以获得高质量DNA片段。

5  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm, 离心1min，弃滤液。

6  12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中的液体。

    ● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

7  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处，悬空滴加30-100 µl溶液Eluent（60℃预热），静置2min。12,000 rpm离心1min，管底即为目的DNA片段。贮存于-20℃。

   ● 溶液Eluent可用无菌双蒸水代替，但其pH需为8.0-8.5，加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

   ● 对溶液Eluent 65℃预热，会提高提取DNA目的片段的产量。