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CTGF ELISA 试剂盒
结缔组织生长因子CTGF(Connective Tissue Growth Factor)是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38 kDa的分泌蛋白。除了参与细胞粘附和软骨细胞的增殖和分化以外,它也被认为是组织纤维化的一个主要因素,还可作为纤维化疾病的候选标志物。
FUJIFILM Wako可提供用于检测CTGF全长的ELISA试剂盒以及检测全长+N末端的ELISA试剂盒,通过组合使用这两种ELISA试剂盒,能够准确检测作为特发性肺纤维化(IPF)候选生物标志物的血液N末端CTGF片段。
◆什么是CTGF?
CTGF( Connective Tissue Growth Factor)是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38kDa的分泌蛋白。它是CCN (Cyr61/CTGF /Nov)家族的一种,亦称为CCN2。CTGF主要由Module 1 - Module 4的四个部分组成,Module 1称为IGF结合结构域,Module 2称为VWC结构域,Module 3称为TSP-1结构域,Module 4称为CT结构域。各结构域通过与不同的因子结合来发挥作用。

CTGF在组织纤维化中发挥重要作用,因此可作为纤维化的候选生物标志物。CTGF由TGF-β诱导表达,通过促进产生细胞外基质的肌成纤维细胞的分化和胶原蛋白的合成,从而参与纤维化1)。在小鼠皮肤纤维化中,TGF-β和CTGF已被证明分别在纤维化的发生和持续中起重要作用2)。此外,还有报告称CTGF与软骨细胞的增殖和分化,细胞间的粘连有关。
CTGF除了全长CTGF之外,还有Module 2 - Module 3间被切断产生的N末端(Module 1-2)CTGF和C末端(Module 3-4)CTGF。由于CTGF(C末端)容易被分解,所以血液中主要以CTGF (全长)和CTGF (N末端)的形式存在。CTGF (N末端)作为特发性肺纤维化(IPF: Idiopathic Pulmonary Fibrosis)的生物标志物备受期待3),但由于CTGF(全长)和CTGF(N末端)同时存在,所以单独检测CTGF(N末端)非常困难。
◆试剂盒组成
| 96次用 |
|
| 抗体固相化孔板 |
1 plate |
| CTGF标准品 |
1支 |
| 缓冲液 |
20 mL |
| 生物素结合抗体溶液 |
100 μL |
| 过氧化物酶结合链霉亲和素溶液 |
100 μL |
| TMB溶液 |
12 mL |
| 反应终止液 |
12 mL |
| 清洗液(10×) |
100 mL |
| 标准品样品制备溶液 |
100 mL |
| 孔板封条 |
4片 |
◆CTGF ELISA试剂盒 Wako
FUJIFILM Wako可分别提供检测CTGF全长以及全长+N末端的ELISA试剂盒。通过组合使用两种ELISA试剂盒,可准确检测特发性肺纤维化(IPF)的生物标志物——血液中的N末端CTGF4)。

产品系列
| 产品名称 |
CTGF(全长)ELISA试剂盒 Wako |
CTGF(全长+N末端)ELISA试剂盒 Wako |
| 产品编号 |
290-84701 |
292-84901 |
| 检测对象 |
CTGF(全长) |
CTGF(全长+N末端) |
| 检测原理 |
|
|
| 样品 |
人血清,人血浆(EDTA) |
|
| 标准曲线范围 |
7.81-500 pM |
|
| 所需样品量 |
人血清:5 μL,人血浆(EDTA):10 μL |
|
| 检测时间 |
2 h 50 min |
|
| 检测法 |
显色法 |
|
◆性能数据
■ 全长,N末端片段,C末端片段的交叉性
分别使用各ELISA试剂盒与全长,N末端片段,C末端片段反应,确认其交叉性。

【结果】
CTGF(全长)ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长,CTGF(全长+N末端)ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长和N末端片段。
■ 与CCN家族的交叉性
确认了包含CTGF在内的与CCN家族的交叉率(500 pM,n=8)。
| CTGF ELISA(全长) 交叉率 (%) |
CTGF ELISA(全长+N末端区域) 交叉率 (%) |
|
| CCN1 |
<0.5 |
N.D. |
| CCN2(CTGF) |
100 |
100 |
| CCN3 |
<0.5 |
N.D. |
| CCN4 |
<0.5 |
N.D. |
| CCN5 |
<0.5 |
N.D. |
| CCN6 |
<0.5 |
N.D. |
N.D. = 未检出
【结果】
FUJIFIM Wako的试剂盒在CCN家族中,对CCN2(CTGF)显示高特异性。
■ 加标回收测试
CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako
| 样品ID |
添加量 (pM) |
检测值 (pM) |
回收量 (pM) |
回收率 (%) |
| 人血清 |
0 |
61.5 |
― |
― |
| 10 |
71.4 |
9.9 |
99 |
|
| 50 |
110 |
48.5 |
97 |
|
| 100 |
163 |
102 |
102 |
|
| 150 |
215 |
154 |
103 |
|
| 300 |
370 |
309 |
103 |
|
| 平均 |
101 |
|||
| 人血浆(EDTA) |
0 |
71.5 |
― |
― |
| 10 |
80.8 |
9.3 |
93 |
|
| 50 |
121 |
49.5 |
99 |
|
| 100 |
174 |
103 |
103 |
|
| 150 |
227 |
156 |
104 |
|
| 300 |
380 |
309 |
103 |
|
| 平均 |
100 |
CTGF(全长) ELISA试剂盒 Wako
| 样品 |
添加量 (pM) |
检测值 (pM) |
回收量 (pM) |
回收率 (%) |
| 人血清 |
0 |
37.8 |
― |
― |
| 10 |
47 |
9.2 |
92 |
|
| 50 |
87.4 |
49.6 |
99.2 |
|
| 100 |
141 |
103 |
103 |
|
| 150 |
191 |
153 |
102 |
|
| 300 |
343 |
305 |
102 |
|
| 平均 |
99.6 |
|||
| 人血浆 (EDTA) |
0 |
16.9 |
― |
― |
| 10 |
26.2 |
9.3 |
93 |
|
| 50 |
65.6 |
48.7 |
97.4 |
|
| 100 |
122 |
105 |
105 |
|
| 150 |
173 |
156 |
104 |
|
| 300 |
326 |
309 |
103 |
|
| 平均 |
100 |
■ 稀释线性测试
CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako
| 人血清 |
人血浆 |
|
|
|
CTGF(全长) ELISA试剂盒 Wako
| 人血清 |
人血浆 |
|
|
|
◆应用数据
■ N末端CTGF的检测(稀释线性测试)
使用梯度稀释的人血清或人血浆(EDTA),用CTGF(全长+N末端)ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长+N末端, 用CTGF(全长)ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长。求差值计算CTGF(N末端)量,确认稀释线性。
|
|
|
| 样品 |
稀释倍率 |
CTGF(全长+N末端)(pM) |
CTGF(全长)(pM) |
CTGF(N末端)(pM) |
| 人 血清 |
1/1 |
1735 |
952 |
783 |
| 1/2 |
875 |
495 |
380 |
|
| 1/4 |
417 |
237 |
180 |
|
| 人 血浆(EDTA) |
1/1 |
684 |
126 |
558 |
| 1/2 |
347 |
66.2 |
281 |
|
| 1/4 |
157 |
34.9 * 参考值 |
122 |
【结果】
使用该方法检测定量CTGF(N末端),可观察到高稀释线性。
■ 健康者和IPF患者血浆中N末端CTGF的检测
使用CTGF(全长+N末端)ELISA试剂盒 Wako和CTGF(全长)ELISA试剂盒 Wako,检测从健康者以及特发
性肺纤维化(IPF)患者中提取的血浆(EDTA),并求出N末端CTGF的量。

| 健康者 |
|||
| ID |
CTGF(全长+N末端)(pM) |
CTGF(全长)(pM) |
CTGF(N末端)(pM) |
| 1 |
494 |
83.4 |
411 |
| 2 |
535 |
116 |
419 |
| 3 |
580 |
155 |
425 |
| 4 |
661 |
129 |
532 |
| 5 |
383 |
63.5 |
319 |
| mean |
421 |
||
| SD |
75.6 |
||
| IPF患者 |
|||
| ID |
CTGF(全长+N末端)(pM) |
CTGF(全长)(pM) |
CTGF(N末端)(pM) |
| 1 |
1226 |
213 |
1013 |
| 2 |
1004 |
187 |
817 |
| 3 |
432 |
35.4 |
397 |
| 4 |
1422 |
278 |
1144 |
| 5 |
938 |
39.9 |
898 |
| 6 |
682 |
73.2 |
609 |
| 7 |
1123 |
168 |
955 |
| 8 |
849 |
45.5 |
804 |
| 9 |
857 |
60.6 |
796 |
| mean |
826 |
||
| SD |
221 |
||
【结果】
IPF患者血浆中N末端的CTGF量明显高于健康者。
※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。
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