TRAzol伴侣

TRAzol伴侣

产品说明

TRAzol是经典的总RNA提取试剂，也是各家生物公司、实验人员提取RNA最常用的试剂。康朗生物在使用TRAzol提取的传统方法上，加以改进，推出TRAzol伴侣，简化操作步骤，可在更短时间内获得纯度更高的RNA。本产品可搭配各公司TRIzol及其他基于酸酚/异硫酸胍提取原理的RNA提取产品,包括TRIzol、TRIzol LS、TRI Reagent等，从动物组织、植物组织、各种微生物、培养细胞等中提取总RNA。所得总RNA纯度高，基本不含蛋白质及基因组DNA。提取的RNA可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

 

产品组成

货号	KL1071（100次）
溶液RPI	36 ml
溶液RW	24 ml
DEPC处理水	20 ml
RNase-free 纯化柱	100个
RNase-free 收集管	100个
说明书	1份

需要自备无水乙醇溶液

 

保存条件

室温保存。

 

注意事项

●  严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。

●  第一次使用前应在溶液RPI和溶液RW中加入无水乙醇，加入量为溶液RPI：无水乙醇=3：2，溶液RW：无水乙醇=1：4，即每36 ml溶液RPI需要加入24 ml无水乙醇，每24 ml溶液RW需要加入96 ml无水乙醇。

●  使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下（与组织pH值等相关），如果有DNA污染而又必须去除，则可以用RNase-free的DNase处理样品。

●  请严格遵照操作步骤操作。

●  不同起始材料用量会影响RNA的产率。

 

操作步骤

第一次使用前应在溶液RPI、溶液RW中加入无水乙醇，加入量请参考瓶上标签。

1  按TRAzol（Cat. #：R1021/R1022）的使用手册进行总RNA提取到经氯仿处理得到上清液。

2  缓慢加入0.5倍体积无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到溶液和沉淀一起转入纯化柱（纯化柱+收集管）中，4℃ 12,000 rpm离心30 s，4℃ 12,000 rpm离心30 s，弃掉收集管中的废液。（若一次不能将全部溶液和混合物加入纯化柱中，可以分两次离心。）

3  向纯化柱中加入500 μl溶液RPI（使用前请先检查是否已按3:2加入无水乙醇，即含40%乙醇），4℃ 12,000 rpm离心30 s，弃废液。

4  向纯化柱中加入500 μl溶液RW（使用前请先检查是否已按1:4加入无水乙醇，即含80%乙醇），室温静置2 min，4℃ 12,000 rpm离心30 s，弃废液。

5  重复上步操作，去除残余液体。

6  将纯化柱放回2ml收集管中，4℃ 12,000 rpm空离2 min，去除残余液体。

注意：此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除，离心后将纯化柱在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验操作。

7  将纯化柱转入一个新的1.5 ml离心管中，加30–100 μl RNase-free ddH2O，室温放置2 min，4℃ 12,000 rpm离心2 min。

洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA应保存在-70℃，以防降解。

注意：如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。