海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒

DNA凝胶回收试剂盒
规格价格：50次/631.00元
规格价格：100次/1138.00元
规格价格：200次/2184.00元

货号	KL1171 （50次）	KL1172 （100次）	KL1173 （200次）
消化缓冲液DS	15 ml	30ml	60 ml
裂解液MS	20 ml	40ml	80 ml
蛋白酶K	1 ml	2ml	4 ml
去蛋白液PS	30 ml	60ml	120 ml
漂洗液PE	15 ml	30ml	30 ml×2
纯化液TE	5 ml	10ml	20 ml
DNA纯化柱	50个	100个	200个
说明书	1份	1份	1份

 

● 裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

产品说明

本产品用于各种海洋动物组织（新鲜或冻存）样本的基因组DNA的纯化。已成功提取鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物组织基因组DNA。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材料中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA（OD₂₆₀/OD₂₈₀ = 1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。

 

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

 

保存条件

蛋白酶K室温运输，于-20℃保存，避免反复冻融。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中有沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

 

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

● 漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇，即15 ml漂洗液PE加入45 ml无水乙醇，30 ml漂洗液PE加入90 ml无水乙醇，使用后立即盖紧盖子。

● 消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生，在55℃加热溶解，待恢复至室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

● 应尽量使用新鲜的实验材料，确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-80℃冰箱中保存，并避免反复冻融。

● 使用液氮研磨组织材料时，应随时加入液氮，确保提取的基因组DNA不被降解。

● 基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

● 所有离心步骤均为室温进行。

● 请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  取少量样本材料，放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮，直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中，每管组织材料含量应不超过10 mg。

如果没有液氮，尽快将组织切小置于离心管，进入下一步。

● 每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10μg基因组DNA。样本量过大，将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱，进而降低基因组DNA的得率与纯度。

2  加入200 μl消化缓冲液DS，涡旋振荡15 s。

   ● 如需去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml，N9042），振荡混匀，室温放置5min。

3  加入20 μl蛋白酶K，涡旋振荡混匀。55℃水浴或金属浴至溶液变清亮，通常需要1-3小时（期间可适当颠倒几次，温浴后简短离心以去除管盖内壁的水珠）。

4  加入220 μl裂解液MS充分颠倒混匀，65℃温浴10 min，简短离心以去除管盖内壁的水珠，室温放置5min使溶液冷却。

   ● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。       

5    加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀，此时可能出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠，将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

   ● 若溶液体积大于纯化柱容积（700 μl），可分两次离心。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

6  加入500 μl去蛋白液PS，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

  ● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质，以获得高质量基因组DNA。

7  加入500μl漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

 ● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

8  加入500 μl漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

9  12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   ● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。

10  将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100μl洗脱液TE，室温放置2min，12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

   ● 洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。

● 对洗脱液TE 65℃预热，会提高基因组DNA的产量。