DNA凝胶回收试剂盒
规格价格:50次/631.00元
规格价格:100次/1138.00元
规格价格:200次/2184.00元
● 漂洗液PE 初次使用前用无水乙醇按1: 3 稀释,即含75%乙醇。
● 客户自备试剂
无水乙醇
巯基乙醇
氯仿(或酚:氯仿/1 :1)
产品说明
本产品可用于拟南芥、烟草、水稻等植物样本的基因
纯化。纯化原理是利用硅胶膜柱可逆吸附体系中的
DNA,经漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多
纯化液洗脱获得基因组DNA。一次可从不超过100
材料中提取到 2-20 μg 的高纯度基因组
OD260/OD280=1.7-1.9),此基因组DNA 可直接
酶切等后续实验。
质量控制
纯化的基因组 DNA 质量通过限制性酶切和单拷
保存条件
RNase 保存于-20℃。其他的室温保存
注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
● 漂洗液PE 第一次使用前请按瓶上标签加入3 倍体积的无水乙醇,即15 ml 漂洗液PE 加入45 ml 无水乙醇,30 ml 漂洗液PE
加入90 ml 无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。
● 缓冲液GPL 室温保存可能会有沉淀产生,在56℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA 纯化效率。
● 应尽量使用新鲜的实验材料,确保提取的基因组DNA 不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-70℃
冰箱中保存并避免反复冻融。
● 使用液氮研磨组织材料时,应随时加入液氮,确保提取的基因组DNA 不被降解。
● 基因组DNA 需长期保存时,建议使用纯化液TE 。用无菌的离心管分装后保存于-20 ℃或-80 ℃。
● 所有离心步骤均为室温下进行。
● 请严格按照操作步骤操作。
操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 取植物新鲜组织约100 mg 或干重组织约30 mg,加入液氮充分研磨。
2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μl 65℃预热缓冲液GPL 的离心管中(实验前在预热的GPL 中加入巯基乙醇,使其终
浓度为0.1% ),加入1 μl RNase,迅速颠倒混匀后,将离心管放在65℃水浴20 min,水浴过程中颠倒离心管以混匀样品。
3 加入700 μl 氯仿,充分混匀,12,000 rpm (~13,400 ×g )离心5 min 。
● 如果是提取富含多酚或淀粉的植物组织,可在第3 步前,用酚:氯仿/1 :1 进行等体积抽提。
4 小心将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中,加入等体积缓冲液GPD,充分混匀。
5 将混匀的液体转入纯化柱,静置1 min,12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。(吸附柱容积为700 μl 左右,可分次加入离心。)
6 向纯化柱中加入500 μl 去蛋白液PS。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。
7 向纯化柱中加入500 μl 漂洗液PE。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。
8 重复步骤7,向纯化柱中加入500 μl 漂洗液PE。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。
9 离心纯化柱,12,000 rpm 离心2 min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。
● 此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR 或酶切)。同时利于基因组DNA 充分溶解。
10 将纯化柱置于新的1.5 ml 离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加40-100μl 纯化液TE 。室温放置2 min 。12,000 rpm 离心2 min,
管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。
● 纯化液TE 可用去离子水代替,但其pH 需为8.0-8.5 。
● 对纯化液TE 60℃预热,会提高基因组DNA 的产量。