T4 Quick Ligation Mix

T4 Quick Ligation Mix


产品概述
本产品是一种即用型2 × 预混液，内含Rapid T4 DNA Ligase、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液，该设计简化了建立反应所需的步骤。该预混液可完成DNA粘性末端、平末端或单碱基突出末端的连接反应。用本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5 min即可达到反应终点。此外，即使当DNA量少且浓度低时仍可进行克隆连接，为用户节省宝贵的DNA样品，且无需稀释直接转化到多种化学感受态大肠杆菌。


产品内容

组分	KL004A	KL004B
T4 Quick Ligation Mix	250 μL	500 μL

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产品优势
快速：5 min即可完成连接反应。
兼容性强：可连接粘性末端、平末端、单碱基突出末端、Linker以及Adapter。
方便快捷：2×预混液包装，减少加样次数，使得克隆更为高效。


实验案例
1.T/A 5 min快速连接

 
         
       以购买的pMD18-T载体、Taq DNA聚合酶的PCR扩增产物（500 bp）为T/A连接的底物；用T4 Quick Ligation Mix进行25℃，5 min快速连接后，转化到DH5α感受态细胞，培养12-16 h后，平板菌落生长状况如图1所示，随机挑取15颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR，后进行琼脂糖凝胶检测，如图2所示，分析上述结果可得，T4 Quick Ligation Mix对T/A连接具有优异的连接效率。 
2. 粘性末端5 min快速连接

       
        以EcoRΙ、XbalΙ进行双酶切后回收得到的pET-28a载体及基因片段（2kb）作为粘性末端连接底物，用T4 Quick Ligation Mix进行25℃，5min快速连接后，转化到DH5α感受态细胞，培养12-16h后，平板菌落生长状况如图3所示，随机挑取15颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR，后进行琼脂糖凝胶检测，如图4所示，分析上述结果可得，T4 Quick Ligation Mix对粘性末端的连接具有优异连接效及阳性率。
3.   T/A及平末端快速连接

        以pT7BlueT载体及插入片段（1.0 kb）作为T/A连接底物， 以平末端pUC19载体及基因片段（0.5 kb）作为平末端连接底物用从A、B公司购入的同类产品、T4 Quick Ligation Mix进行25℃，5 min快速连接，后转化到DH5α感受态细胞，在含有X-Gal、IPTG、Amp的L-琼脂平板上培养，形成单菌落，并进行菌落计数并计算转化效率。从结果中可看出的T4 Quick Ligation Mix具有较高的转化效率及连接效率。
 
应用范围
粘性末端连接、T/A克隆、平末端连接、dsDNA切刻修复。


产品存储
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