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39
- 英文名：
Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit
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详见说明书
- 供应商：
上海一研
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低温
- 规格：
20次|50次
中文名称：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)
英文名称：Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit
产品规格：20次|50次
发货周期：1～3天
本试剂盒提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。本试剂盒足够检测20个样品。
试剂盒组分：
TdT酶———————————40μl
Biotin-dUTP————————960μl
TdT酶稀释液(选用)—————500μl
Streptavidin-HRP——————22μl
Streptavidin-HRP稀释液———1ml
DAB显色液A————————6ml
DAB显色液B————————6ml
标记反应终止液——————6ml
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin(Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点：
(1)高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2)特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3)快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。
储存条件：-20℃。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；
4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；
5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体英文全称granulysin英文简称GNLY检测范围385nmol/L-4800pg/mL
膜粘连蛋白7抗体英文全称Granulin英文简称GRN检测范围386nmol/L-80ng/mL
早老素γ分泌酶抗体英文全称soluble programmed death-1英文简称sPD-1检测范围387nmol/L-240pg/mL
钠钾ATP酶蛋白a1抗体英文全称soluble CD163英文简称sCD163检测范围388nmol/L-800pg/mL
Rho鸟苷酸交换因子2抗体英文全称soluble CD38英文简称sCD38检测范围389nmol/L-800pg/mL
磷酸化Rho鸟苷酸交换因子2抗体英文全称soluble major histocompatibility complex class I chain-related gene B英文简称sMICB检测范围390nmol/L-160pg/mL
去整合素样金属蛋白酶9抗体英文全称solution OX40 Ligand英文简称sOX40L检测范围391nmol/L-20ng/mL
Rho GTP酶激活蛋白20抗体英文全称sCD146英文简称sCD146检测范围392nmol/L-480ng/mL
含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族10抗体英文全称soluble Toll-like receptor 6英文简称sTLR6检测范围393nmol/L-160ng/mL
乙醛脱氢酶1蛋白家族L1抗体英文全称soluble interleukin 2 receptor英文简称sIL-2R检测范围394nmol/L-480U/mL
轴抑制蛋白2抗体英文全称Soluble Interleukin-7 Receptor英文简称sIL-7R检测范围395nmol/L-400pg/mL
AMPK的相关蛋白激酶5抗体英文全称soluble cluster of differentiation 14英文简称sCD14检测范围396nmol/L-8μg/mL
致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体英文全称soluble Interleukin 6英文简称sIL-6检测范围397nmol/L-48pg/mL
极光激酶A相互作用蛋白1抗体英文全称sHLA-G英文简称sHLA-G检测范围398nmol/L-32ng/mL
艾滋病病毒制约锚定蛋白抗体英文全称sHLA-I英文简称sHLA-I检测范围399nmol/L-1600ng/mL
卵磷脂吐温80营养琼脂250克Lecithin Tween 80 Nutrient Agar化妆品检验中细菌计数
乙酰胺琼脂250克Acetamide Agar绿脓杆菌的选择性分离培养
SCDLP液体培养基250克SCDLP Broth Medium化妆品检验中样品制备、增菌
假单胞菌属选择琼脂250克Cetrimide Agar用于绿脓杆菌的分离培养
普通琼脂斜面培养基(PH8.0-8.2)250克Common Nutrient Agar一般细菌的培养，分离培养霍乱弧菌，埋迪霉菌鉴定用
PDP琼脂250克King Medium A绿脓菌色素测定
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)Radix puerariae葛根PCR鉴定试剂盒 中文名称 微丝相关蛋白1抗体别 名 110 kDa actin filament associated protein; 110 kDa actin filament-associated protein; Actin filament associated protein 1; Actin filament associated protein 110 kDa; Actin filament-associated protein 1; AFAP 1; AFAP 110; AFAP; AFAP-110; Afap1; AFAP1_HUMAN.研究领域 信号转导 细胞凋亡 细胞骨架蛋白分子量 predicted molecular weight: 81kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human AFAP
Rhizoma cibotii狗脊PCR鉴定试剂盒 中文名称 自噬体ATG16L2蛋白抗体别 名 WDR80; A16L2_HUMAN; APG16-like 2; ATG16 autophagy related 16-like 2; Atg16l2; Autophagy-related protein 16-2; WD repeat-containing protein 80.研究领域 肿瘤 免疫学蛋白分子量 predicted molecular weight: 69kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ATG16L2
Fructus lycii枸杞子PCR鉴定试剂盒 中文名称 腺苷A1A受体抗体别 名 A1AR; A1R; AA1R; AA1R_HUMAN; Adenosine receptor A1; ADORA 1; ADORA1; RDC 7; RDC7; Ri.研究领域 心血管 细胞生物 免疫学 神经生物学 信号转导 细胞凋亡 细胞膜受体 G蛋白偶联受体 G蛋白信号蛋白分子量 predicted molecular weight: 37kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ADORA1
Ramulus uncariae cum uncis钩藤PCR鉴定试剂盒 中文名称 芳基硫酸酯酶B抗体别 名 Arylsulfatase B; ArylsulfataseB; ASB; G4S; MPS6; N acetylgalactosamine 4 sulfatase.研究领域 肿瘤 细胞类型标志物蛋白分子量 predicted molecular weight: 60kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ARSB
Rhizoma drynariae骨碎补PCR鉴定试剂盒 中文名称 共济失调蛋白2结合蛋白1抗体别 名 A2 BP1; A2BP 1; A2BP; A2BP1; Ataxin 2 binding protein 1; Ataxin-2-binding protein 1; Ataxin2 binding protein 1; FOX 1; Fox-1 homolog A; FOX1; RFOX1_HUMAN; Hexaribonucleotide binding protein 1; Hexaribonucleotide-binding protein 1; HRNBP 1; HRNBP1.研究领域 发育生物学 神经生物学 结合蛋白 表观遗传学蛋白分子量 predicted molecular weight: 44kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human A2BP1/Fox1
英文名称：Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit
产品规格：20次|50次
发货周期：1～3天
本试剂盒提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。本试剂盒足够检测20个样品。
试剂盒组分：
TdT酶———————————40μl
Biotin-dUTP————————960μl
TdT酶稀释液(选用)—————500μl
Streptavidin-HRP——————22μl
Streptavidin-HRP稀释液———1ml
DAB显色液A————————6ml
DAB显色液B————————6ml
标记反应终止液——————6ml
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin(Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点：
(1)高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2)特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3)快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。
储存条件：-20℃。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；
4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；
5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体英文全称granulysin英文简称GNLY检测范围385nmol/L-4800pg/mL
膜粘连蛋白7抗体英文全称Granulin英文简称GRN检测范围386nmol/L-80ng/mL
早老素γ分泌酶抗体英文全称soluble programmed death-1英文简称sPD-1检测范围387nmol/L-240pg/mL
钠钾ATP酶蛋白a1抗体英文全称soluble CD163英文简称sCD163检测范围388nmol/L-800pg/mL
Rho鸟苷酸交换因子2抗体英文全称soluble CD38英文简称sCD38检测范围389nmol/L-800pg/mL
磷酸化Rho鸟苷酸交换因子2抗体英文全称soluble major histocompatibility complex class I chain-related gene B英文简称sMICB检测范围390nmol/L-160pg/mL
去整合素样金属蛋白酶9抗体英文全称solution OX40 Ligand英文简称sOX40L检测范围391nmol/L-20ng/mL
Rho GTP酶激活蛋白20抗体英文全称sCD146英文简称sCD146检测范围392nmol/L-480ng/mL
含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族10抗体英文全称soluble Toll-like receptor 6英文简称sTLR6检测范围393nmol/L-160ng/mL
乙醛脱氢酶1蛋白家族L1抗体英文全称soluble interleukin 2 receptor英文简称sIL-2R检测范围394nmol/L-480U/mL
轴抑制蛋白2抗体英文全称Soluble Interleukin-7 Receptor英文简称sIL-7R检测范围395nmol/L-400pg/mL
AMPK的相关蛋白激酶5抗体英文全称soluble cluster of differentiation 14英文简称sCD14检测范围396nmol/L-8μg/mL
致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体英文全称soluble Interleukin 6英文简称sIL-6检测范围397nmol/L-48pg/mL
极光激酶A相互作用蛋白1抗体英文全称sHLA-G英文简称sHLA-G检测范围398nmol/L-32ng/mL
艾滋病病毒制约锚定蛋白抗体英文全称sHLA-I英文简称sHLA-I检测范围399nmol/L-1600ng/mL
卵磷脂吐温80营养琼脂250克Lecithin Tween 80 Nutrient Agar化妆品检验中细菌计数
乙酰胺琼脂250克Acetamide Agar绿脓杆菌的选择性分离培养
SCDLP液体培养基250克SCDLP Broth Medium化妆品检验中样品制备、增菌
假单胞菌属选择琼脂250克Cetrimide Agar用于绿脓杆菌的分离培养
普通琼脂斜面培养基(PH8.0-8.2)250克Common Nutrient Agar一般细菌的培养，分离培养霍乱弧菌，埋迪霉菌鉴定用
PDP琼脂250克King Medium A绿脓菌色素测定
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)Radix puerariae葛根PCR鉴定试剂盒 中文名称 微丝相关蛋白1抗体别 名 110 kDa actin filament associated protein; 110 kDa actin filament-associated protein; Actin filament associated protein 1; Actin filament associated protein 110 kDa; Actin filament-associated protein 1; AFAP 1; AFAP 110; AFAP; AFAP-110; Afap1; AFAP1_HUMAN.研究领域 信号转导 细胞凋亡 细胞骨架蛋白分子量 predicted molecular weight: 81kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human AFAP
Rhizoma cibotii狗脊PCR鉴定试剂盒 中文名称 自噬体ATG16L2蛋白抗体别 名 WDR80; A16L2_HUMAN; APG16-like 2; ATG16 autophagy related 16-like 2; Atg16l2; Autophagy-related protein 16-2; WD repeat-containing protein 80.研究领域 肿瘤 免疫学蛋白分子量 predicted molecular weight: 69kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ATG16L2
Fructus lycii枸杞子PCR鉴定试剂盒 中文名称 腺苷A1A受体抗体别 名 A1AR; A1R; AA1R; AA1R_HUMAN; Adenosine receptor A1; ADORA 1; ADORA1; RDC 7; RDC7; Ri.研究领域 心血管 细胞生物 免疫学 神经生物学 信号转导 细胞凋亡 细胞膜受体 G蛋白偶联受体 G蛋白信号蛋白分子量 predicted molecular weight: 37kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ADORA1
Ramulus uncariae cum uncis钩藤PCR鉴定试剂盒 中文名称 芳基硫酸酯酶B抗体别 名 Arylsulfatase B; ArylsulfataseB; ASB; G4S; MPS6; N acetylgalactosamine 4 sulfatase.研究领域 肿瘤 细胞类型标志物蛋白分子量 predicted molecular weight: 60kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ARSB
Rhizoma drynariae骨碎补PCR鉴定试剂盒 中文名称 共济失调蛋白2结合蛋白1抗体别 名 A2 BP1; A2BP 1; A2BP; A2BP1; Ataxin 2 binding protein 1; Ataxin-2-binding protein 1; Ataxin2 binding protein 1; FOX 1; Fox-1 homolog A; FOX1; RFOX1_HUMAN; Hexaribonucleotide binding protein 1; Hexaribonucleotide-binding protein 1; HRNBP 1; HRNBP1.研究领域 发育生物学 神经生物学 结合蛋白 表观遗传学蛋白分子量 predicted molecular weight: 44kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human A2BP1/Fox1
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文献和实验相关实验
的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡，其中 TUNEL 法做的最多，我购买的试剂盒主要是 roche、 promega 公司，结果大多数成功，偶尔也有失败，下面我把实验中的关键问题与大家共享一下，同时也希望能对初学者有所帮忙。 TUNEL 法的实验原理 基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内，在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合，再用 HRP 标记的链霉
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
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