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- 信裕生物
- XY1731
- 中国
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
TUNEL Apoptosis Detection Kit
- 保质期：
有效期12个月
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
常温
- 规格：
20T;
产品简介
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，TdT）的催化下加上绿色荧光探针FITC标记的dUTP，之后经过POD转换试剂将信号转化成显色反应，方便结果的分析与保存。Tunel细胞凋亡检测试剂盒不依赖生物素系统进行末端标记，避免了内源性生物素产生的高背景等问题。
操作步骤
A. 对于贴壁细胞：
a. 接种于24/48/96孔板的细胞用PBS漂洗5min。
b. 预冷的4%4℃固定细胞30-60min。
c. PBS漂洗细胞3次，每次5min。
d. 加入含0.1%-0.2% Triton X-100 的 PBS（现用现配），冰浴2-5min
e. 转至步骤2
B. 对于悬浮细胞：
a. 收集0.5-2×106 个细胞，PBS漂洗一次 , 1000rpm 离心5min
b. 预冷的4%于4℃固定细胞30-60min
c. PBS漂洗一次
d. 加入含0.1%-0.2% Triton X-100的PBS（现用现配），冰浴2-5min
e. 转至步骤2
C. 对于石蜡切片：
a. 脱蜡，组织切片置于60℃恒温箱，烤片30-60min，浸入装有新鲜二甲苯的染色缸，室温放置15min。浸入另一个装有新鲜二甲苯的染色缸，重复一次。
b. 洗涤，组织切片浸入100%乙醇染色缸，室温放置10min。浸入另一个100%乙醇染色缸，重复一次。
c. 水化，组织切片浸入梯度浓度乙醇溶液（90%，80%，70%，50%），室温下每步放置3min。
d. 组织切片浸入PBS，室温放置5min。
e. 组织切片用柠檬酸缓冲液（PH=6.2）进行中火修复5min。（对于有些组织可以用1xProteinase K进行通透，即每个组织滴加50μl用PBS稀释的1×Proteinase K，室温静置15-30min，具体通透时间因组织而异，需要自行摸索）
表1. 准备用于通透的1×Proteinase K缓冲液
1×Proteinase K 50ul反应中所需体积 反应数 总体积
50×Proteinase K 5ul × =
PBS 45ul × =
f. 组织切片浸入PBS 室温放置5min 重复漂洗3次，如果用Proteinase K通透则必须彻底去除残留Proteinase K 否则影响后续实验结果
g. 转至步骤2
D. 对于冰冻切片 :
a. 预冷的4%于4℃固定切片30-60min
b. 组织切片浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗2次
c. 组织切片用柠檬酸缓冲液（PH=6.2）进行中火修复5min。
d. 组织切片浸入PBS 室温放置5min 重复漂洗3次，如果用Proteinase K通透则必须彻底去除残留Proteinase K 否则影响后续实验结果
e. 转至步骤2
2. 每个组织或细胞样本滴加50ul 3% ，室温避光静置10min。
表2. 准备用于封闭的3% H2O2缓冲液
3% H2O2 50ul反应中所需体积 反应数 总体积
30% H2O2 5ul × =
甲醇 45ul × =
3. 组织切片或细胞浸入PBS 室温避光放置5min 重复漂洗2次。
4. 阳性对照（选做）: 阳性对照的组织滴加50μl阳性对照缓冲液 24孔板每孔大概需要100-150μl 室温静置10min ，浸入PBS 室温放置5min 重复漂洗3次。
表3. 准备用于实验的阳性对照缓冲液
阳性对照缓冲液 50ul反应中所需体积 反应数 总体积
10xDNase I 5ul × =
1×DNase I Buffer 45ul × =
注：为避免交叉污染，阳性对照组请用单独的染色缸漂洗！
5. 每个组织滴加50μl Tunel反应缓冲液（24孔板每孔大概需要100-150μl）， 37℃，避光孵育60-90min。
表4. 准备用于实验的Tunel反应缓冲液
Tunel反应缓冲液 50ul反应中所需体积 反应数 总体积
10xEnzyme Reagent 5μl-7μl × =
1xLabeling Substrate 43μl-45μl × =
6. 阴性对照（选做）：用于进行阴性对照的组织或细胞滴加不含10×Enzyme Reagent 的Tunel反应缓冲液（45μl 1×Labeling Substrate与5μl去离子水混合），37℃，避光孵育60-90min。
7. 组织切片或细胞浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗3次。
8. 每个组织滴加50μl POD转换缓冲液（24孔板每孔大概需要100-150μl），37℃，孵育30min。
表5. 准备用于封闭的POD转换缓冲液
POD转换缓冲液 50ul反应中所需体积 反应数 总体积
10xPOD Reagent 5ul × =
PBS 45ul × =
9. 组织切片或细胞浸入PBS , 室温放置5min 重复漂洗3次
10. 每个组织或细胞样本滴加50 DAB显色剂（24孔板每孔大概需要100-150 室温孵育2-5min 根据实际显色情况 自行摸索显色时间。
表6. 准备用于实验的DAB显色剂
DAB显色剂 50ul反应中所需体积 反应数 总体积
20×DAB Reagent A 2.5ul × =
20×DAB Reagent B 2.5ul × =
PBS 45ul × =
11. 复染细胞核：用苏木素复染细胞核，（组织染色1min，细胞染色数秒）。
12. A. 对于贴壁细胞或细胞涂片：蒸馏水返蓝后，用50%甘油封片，随即进行显微镜观察；
12. B. 对于切片：用1%盐酸酒精分化数秒，自来水返蓝。之后进行一下步骤：
a. 脱水，组织切片浸入梯度浓度乙醇溶液（50%，70%，80%，90%），室温下每步放置3min；
b. 洗涤，组织切片浸入100%乙醇染色缸，室温放置10min。浸入另一个100%乙醇染色缸，重复一次；
c. 透明，组织切片浸入装有新鲜二甲苯的染色缸，室温放置15min。浸入另一个装有新鲜二甲苯的染色缸，重复一次
d. 中性树胶封片，通风橱内晾干，置于显微镜下观察。
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文献和实验Detection of Apoptosis by the TUNEL Assay
Apoptosis is the name given to a normal cell process—that of programmed cell death. As the term implies, this is normally a well controlled and highly regulated series of events leading to the elimination of an “unwanted” cell
Detection of Apoptosis by TUNEL Assay
Terminal deoxynucleotidyl transferase (T dT) dU TP N ick-E nd L abeling (TUNEL) assay has been designed to detect apoptotic cells that undergo extensive DNA degradation during the late stages of apoptosis. The method is based on the ability
Detection of apoptotic process in situ using immunocytochemical and TUNEL assays
breaks in fine-needle aspiration biopsies by in situ end labeling of fragmented DNA. Cytometry 15: 169. 4. Li, X., Darzynkiewicz, Z. 1995. Labelling DNA strand breaks with BrdUTP. Detection of apoptosis and cell proliferation. Cell Prolif . 28: 571
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