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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Rat Angiotensin Converting Enzyme 1 Gene ORF cDNA clone expression plasmid, C-Flag tag
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:ACE
反应种属:Rat
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Rat angiotensin I converting enzyme (peptidyl-dipeptidase A) 1 with C terminal Flag tag.
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文献和实验会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒(cDNA / ORF) 外源启动子(CMV、EF1α 等)驱动,表达量与内源调控完全脱钩; 通常只包含单一 CDS,不含内含子和 UTR; 表达量可达到内源的几十到几百倍; 可携带标签(FLAG、HA、GFP)方便检测。 CRISPRa(dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag) 失活 Cas9(dCas9)融合转录激活域,被 gRNA 引导至靶基因启动子区; 激活的是内源位点,转录本包含完整的内含
出来,可能两个原因,第一个是抗体不好,第二个可能是质粒没做好,发生移码了,因为你用的是pEGFP-N2载体,gfp是在n端,就算发生了移码一样可以检测到绿色萤光,仔细检查下你做的质粒看看是否正确。 liuruya 谢谢大家的回复 1.WB应该是没有技术问题,用的是GFP或flag的标签抗体,而且设置了之前做过的基因做阳性对照 2.GFP质粒测序过是完整的且没有移码,flag的是自己构建的也反复check过没有问题 觉得很妖怪 问了当时给我质粒
常见表位标签和序列常用表位标签的生物化学特性总结如下:氯霉素乙酰转移酶(CAT)这个 24kDa 大小的标签也用作报道基因,与大多数蛋白质融合时依然能保留其活性。这意味着它可以用来直接测量表达水平,而不需要 PAGE 或免疫检测。二氢叶酸还原酶(DHFR)这个 25kDa 蛋白质参与胸苷生物合成途径。带有这个标签的蛋白质的纯化可以通过甲氨蝶呤连接的树脂实现。FLAG带电的八肽序列(DYKDDDDK),可用于蛋白检测,特别是在串联为 3xFLAG™表位(DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDK
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