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- 百奥莱博
- WH0196-HGM
- 北京
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
446
- 英文名：
pTG-T-vector Fast Ligation Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存1年，避免反复冻融
- 规格：
20μl|60μl
特别提示：包括pTG-T载体快速连接试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：pTG-T载体快速连接试剂盒
英文名称：pTG-T-vector Fast Ligation Kit
产品货号：WH0196
产品规格：20μl|60μl
本试剂盒中的Fast pTG-T载体是一种高效克隆PCR产物的专用载体，经由克隆质粒在XcmI内切酶酶切后得到的带3" T突出末端的线性化载体，通过该方法产生的带有3" T突出末端的线性化载体效率远高于传统酶切加尾法。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3"端添加一个A，可与T-Vector 3"端的T互补连接。
试剂盒中配备了新型的Rapid Ligation Mix（目录号：WH0193）为高效的T4 DNA连接酶反应试剂，其中含有连接增强剂、酶稳定剂，可大大缩短连接时间、提高PCR产物的连接和克隆效率。
产品特点：
·高效快速：5min快速连接，阳性率近100%。
·灵敏广泛：适合低至0.025pmol浓度片段和长至8 kb片段的高效连接。
·操作便捷：配合使用新型RapiLigation Mix，只需加入载体和片段即可进行连接反应。
试剂盒组成：
| 组分 | WH0196-1 | WH0196-2 |
| Fast pTG-T-Vector | 20μl | 60μl |
| Rapid Ligation Mix（2×) | 100μl | 100μl×3 |
| Control Insert DNA（688bp)（50ng/μl) | 10μl | 10μl |
| ddH2O | 1ml | 1ml |
保存条件：-20℃保存1年，避免反复冻融。（载体和连接试剂可以适当的分装成小份，防止反复冻融，以保证质量）。
不同片段使用量：
载体与片段的摩尔比控制在1:3～1:10，请根据凝胶电泳或紫外分光光度计检测后的浓度和片段长度来计算其摩尔比。插入片段用量，可根据以下公式粗略计算：
插入片段用量ng=（3～10)×（插入片段长度/载体长度
)×载体用量ng
连接体系中50ng的载体，不同大小的PCR产物最佳加入量举例如下：
| PCR产物长度 | 最佳的使用量 |
| 700bp | 35ng |
| 2000bp | 100ng |
反应体系：标准体系为10μl体积，5μl的反应体系也能取得很好的效果，试剂用量减半。
载体图谱：
注意事项：
1．连接使用的PCR片段3"端应带有A末端，如果是使用pfu等高保真聚合酶扩增的不带A末端的平末端片段，可选用零背景快速克隆试剂盒（WH0191/WH0192）或Fast pTG-T平末端连接试剂盒（WH0213）进行连接反应。
2.转化过程中使用Control Insert DNA做对照是非常必要的，在实验出现问题时可以确定原因。
3.建议留下部分连接产物，在出现问题后能迅速的补救，减少不必要的重复实验。
4.涂布用量可根据具体实验作相应调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4000rpm，2 min）后吸除部分培养液，留下适量的培养基悬浮菌体后将其涂布于一个平板中（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）。
我公司销售的pTG-T载体快速连接试剂盒北京现货，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验相关专题 北京百泰克—国内自主研发核酸提取与PCR相关试剂盒商家 T载体 是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。 目前市场上常见的T载体 ，根据连接方法可以分成两种： 方法1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体 有P公司、T公司， 可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率 也不错，唯一
4连接酶把PCR片断连接到T载体上，而Topo TA Cloning用的是DNA Topoisomerase。Topoisomerase的用途一般使用在复制DNA前把超螺旋DNA切割使之解旋后，再连接成线性DNA。Topo TA克隆即使用Topoisomerase高效连接的特性把含3`A端的PCR扩增片断快速连接到3`T端载体上，整个反应只需五分钟！一般T4连接酶需过夜才能高效连接。Topo TA克隆系统提供Topoisomerase I载体，感受态细胞，SOC培养基等。1. Add 1ml of TOPO®
/µg DNA），则是连接反应存在问题 如果使用1×109 cfu/µg DNA 的感受态细胞，用试剂盒中的阳性对照进行连接实验， 白色菌落的比例应为70－90％。如连接反应没有优化或失败，虽然转化的总克隆菌数很高（≥1×109 cfu/µg DNA 感受态细胞可获得高至300 个菌落），但白色菌落很少或没有。参见以上“连接反应存在问题”中的建议对策 。问题：采用插入对照DNA片段，连接转化时白色克隆菌数低于60％。可能的原因：10×快速连接缓冲液稀释不当，提供的T4 连接酶缓冲液为十倍浓度，10
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