平末端DNA加T试剂盒北京厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

平末端DNA加T试剂盒北京厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多平末端DNA加T试剂盒等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：平末端DNA加T试剂盒北京厂家
产地：国产|进口
规格：50次
英文名：dT Tailing Kit
品牌：百奥莱博
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dTTP存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dT尾巴，主要用于制备T载体。其流程图如下：


产品特点：
1. 简单，2X Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA成本polymerase等酶合成的DNA片段。
3. 加T后的载体可以作为T载体使用。

产品组成：

 

成分	规格
Taq DNA olymerase(5U/μL)	50μl
2×dT Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：反应前纯化处理：
平末端DNA片段或平末端质粒DNA可以采取胶回收和酚/*仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。必须注意的是，用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/*仿抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加T反应时，切除掉加上的T尾巴，干扰反应。
二：加T反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：

回收的DNA片段	0.2-2μg
2×dT Tailing Buffer	25μL
Taq DNA polymerase(5U/μL)	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时

三：反应后处理
加T反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/*仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/*仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。

平末端DNA加T试剂盒北京厂家极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·RNase抑制剂(猪源)
编号：BTN130834
英文名称：RNase Inhibitor From Pig
规格：500U

·*霉素干粉
编号：BTN60102
英文名称：Chloramphenicol Powder
规格：1g
*霉素是白色至微黄色针状结晶或片状结晶。分子式为C11H12Cl2N2O5，分子量为323.13。真空时升华。无臭,味苦。易溶于醇类,微溶于乙*(代"醚"),不溶于*、石油醚和植物油。水溶液呈中性。熔点150.5～151.5℃。在干燥时稳定，在弱酸性和中性溶液中较安定，煮沸也不见分解，遇碱类易失效。

结构式：


储存条件：常温运输、4℃保存、有效期一年。

·酪蛋白溶液(TBS)
编号：BTN131105A
英文名称：Casein Blocking Solution(TBS)
规格：250mL
即用型酪蛋白(1%)用于封闭非特异性位点。
A型：溶于TBS的Hammarsten级酪蛋白，Kathon防腐剂，pH7.4。
B型：溶于PBS的Hammarsten级酪蛋白，Kathon防腐剂，pH7.4。可用于在使用牛奶封闭背景高时作为替代品使用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·大提柱式细菌RNA提取试剂盒
编号：BTN80905
英文名称：Bacterial RNA Column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是在本公司柱式细菌RNA提取试剂盒(BTN80103)基础上开发的大提升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性和革氏阳性细菌中大量提取总RNA。跟柱式细菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点:
1. 单次样品处理量大，最多可以处理 30mL细菌培养物。
2. 操作简单快速，一次提取只需要 20分钟左右。
3. 所得 RNA 纯度高，OD260/OD280一般在2.0左右。一般不含基因DNA污染。
4.适用于各种革氏阴性和革氏阳性细菌。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
通用预洗脱液	5ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在 50mL塑料离心管中进行的大量提取的。

1.在 50mL塑料离心管中离心收集10-30mL新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
2. 吸尽液体培养基，加入10mL溶液A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
3. 加入0.2倍体积的自备*仿(10mL溶液A需2mL*仿)，振荡器上充分振荡混均 30秒。
4. 5000-7000 rmp室温离心 3～5分钟。
5. 将上清液(约5-6mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的50mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有 DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下少许上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
6. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。加入溶液B后，溶液为乳白色。
7. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000rpm室温离心 1分钟，弃穿透液。
8. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心 1分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加 10mL 通用洗柱液，室温离心 1分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温 5000-7000rpm离心 2分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA的使用。
11. 加入1mL 通用预洗脱液，5000-7000rpm离心 1分钟。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入1mL RNA 洗脱液。
13.室温 5000-7000rpm离心 2分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. 重复 14-15 步一次，我司的大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次洗脱还能洗脱较多的RNA。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如百奥莱博的RNAload)。


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·尿嘧啶-DNA糖基化酶(人单链选择性单功能)(hSMUG1)
编号：BTN130649
英文名称：Human Singlestrand- selective Monofunctional Uracile-DNA Glycosylase
规格：500U
人类单链选择性单功能尿嘧啶-DNA糖基化酶作用于单链和双链DNA上的脱氧尿嘧啶和在C5位携带氧化基团的脱氧尿嘧啶衍生物，如5-羟基尿嘧啶、5-羟甲基尿嘧啶和5-甲*(代"酸")基尿嘧啶。其反应示意图如下：


产品特点：
1．DNA的氧化损伤研究；
2．单细胞凝胶电泳(彗星实验)。

产品组成：

成份	规格
hSMUG1(5000U/mL)	100μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在10μl反应体系中，37℃条件下，1小时从含有单一dU位点的34bp双链寡核苷酸上催化切除1pmol脱氧尿嘧啶所需的酶量。


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·柱式土壤DNA提取试剂盒
编号：BTN71205
英文名称：Soil DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。

试剂盒特点：
1. 去污染效果更好，得到的DNA可以直接作为PCR模板或酶切，不需要再进行去腐殖酸处理。
2. 操作过程更加简单快速，整个操作只需要10多分钟，扩容性好。
3.产量高，每克土壤一般可以提取到5-50μg DNA，片段长度在20-50 Kb，OD260/280一般都在1.8以上。
4.适合于各种土壤(包括河海沉积物)。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	40ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0.5mL加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取0.1-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较大离心管。也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 12000～15000g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为300-400μl)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7mL左右。
 注意：下面第8-第9步的*仿抽提操作可以省略，直接进入第10步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果直接进入第10步，则转移的溶液体积不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。
8. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 12000～15000g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。将上清转移到新的1.5mL离心管时，不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。
10. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀。
11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液)。
12. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 如果有必要，可以再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。
14. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中，加入50-100μL DNA洗脱液2.0。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

疑难解答：
Q: 如何判断提取的DNA没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污Q: 如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示 DNA 不能使用，有的腐殖酸并不抑制 PCR扩增。
Q: 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
A：腐植酸(humic acid)是一大类呈棕黑色或黑色的物质，其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同，有的土壤的腐殖酸在 260nm 有最大吸收(见 Appl.Environ. Microbiol.，63：4993，1997)，有的则在 340nm。所以用特定的波长测定 OD 值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma，Fluke等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q:是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品(已知的不含污染的DNA)能够发生，说明可能抑制作用。
Q：如果得到的DNA样品还是含有抑制后续反应的腐植酸，如何去除？
A：如果提取的DNA原液不能扩增，可以将样品稀释10倍和100倍再进行 PCR，抑制作用一般可以解除。如果仍然抑制，可以使用我公司的PCR Inhibitor Scavenger(BTN60804)。如果仍然不能解除，则可以通过柱式腐殖酸清除剂(BTN60801)或先电泳，再用超大片段胶回收试剂 Magic Gel DNArc(BTN60706)纯化土壤 DNA，去除残留抑制剂。其中后两方法最有效，得到的原液一般可以直接扩增。
Q：在用土壤 DNA进行细菌专一性 PCR时，为何没加 DNA 模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组 DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。

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