- ￥1215 - 6808
- 爱必信(absin)
- abs60341
- 上海
- 2025年07月16日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Firefly & Renilla Assay Kit
- 保质期：
-
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃保存
- 规格：
100T/1000T
| 规格： | 100T | 产品价格： | ￥1215.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 1000T | 产品价格： | ￥6808.0 |
买实验好货，找爱必信！
| 描述 | Firefly & Renilla Assay Kit（双萤光素酶报告基因检测试剂盒）为检测基因的表达量提供有效的手段，在 DLR检测中，萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）和海肾萤光素酶（Renilla luciferase）的活性可在单个样品中依次检测。先以萤光素（Luciferin）为底物来检测萤火虫萤光素酶的活性，然后加入抑制萤火虫萤光素酶催化的物质，同时加入腔肠素（Coelenterazine）检测海肾萤光素酶的活性，实现双萤光素酶报告基因检测。通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或 5' 启动子区克隆在 Luciferase 的上游，或把 3'-UTR 区克隆在 Luciferase 的下游，构建成报告基因（Reporter gene）质粒，然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，通过检测萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。海肾萤光素酶更多地被用作检测转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。 萤火虫萤光素酶是一种分子量约为 61kD的蛋白，在 ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化萤光素生成氧化萤光素（Oxyluciferin），在萤光素被氧化的过程中，会产生光信号。海肾萤光素酶是一种分子量约为 36 kD 的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化腔肠素氧化成肠酰胺（Coelenteramide），在腔肠素氧化的过程中也会产生光信号。本试剂盒的光信号可以通过化学发光仪、酶标仪或液闪测定仪进行测定。该试剂盒具有检测迅速、灵敏度高、检测范围广，无细胞内源活性干扰等特点。Promega E2940 产品组分：
| ||||||||||||||||||||||||
| 使用方法 | 1、细胞裂解 （1）将培养基移除，加 PBS 轻轻洗涤两次（贴壁细胞可直接进行此操作，悬浮细胞需离心收集细胞）。按如下方案加入 1×Lysis Buffer（用无菌水按 4: 1 稀释组分 A），然后将培养板放在微型震荡器上室温震荡 15 min，充分裂解细胞。
（2）将裂解产物 10000-15000 rpm 离心 3-5 min，离心后将上清液移入新的 EP 管中进行后续检测。 注：细胞裂解后可立即检测，也可以冻存，需要时再检测。冻存样品需融解至室温再进行检测。 2、工作液配制 （1）将所有组分恢复至室温。 （2）用组分 B 充分溶解组分 C，配制成 0.2 mg/mL 的萤火虫萤光素酶工作液。 注：萤火虫萤光素酶工作液不能反复冻融，若单次实验用量较少，建议按单次使用量分装成小规格。 （3）用组分 D 将组分 E 稀释成海肾萤光素酶工作液，稀释方法为 1 ul E 组分加入到 49 µL D 组分中。 注：海肾萤光素酶工作液需现用现配。 3、化学发光值检测 （1）按照仪器操作说明书开启具有检测化学发光功能的仪器，如多功能酶标仪，设定参数，测定时间为 10 s，测定间隔为2 s。 （2）每个样品测定时，取样品 20-100 ul（如果样品量足够，请加入 100 ul；如果样品量不足可适当减少用量，但检测孔用量需保持一致）。1×Lysis Buffer 为空白对照。 （3）加入 100 ul 萤火虫萤光素酶检测液，测定 RLU（relative light unit）值（建议酶标仪设置 Shaking 混匀功能）。 注：由于该发光为瞬时发光，建议加入萤火虫萤光素酶工作液后，立即进行检测。 （4）加入 100 ul 海肾萤光素酶工作液，测定 RLU（relative light unit）值（建议酶标仪设置 Shaking 混匀功能）。 （5）在以海肾萤光素酶为内参的情况下，用萤火虫萤光素酶测定得到的 RLU 值除以海肾萤光素酶测定得到的 RLU 值。根据得到的比值来比较不同样品间目的报告基因的激活程度。如果以萤火虫萤光素酶为内参，也可以进行类似计算。 | ||||||||||||||||||||||||
| 储存/保存方法 | -80℃保存。C 组分建议预先使用无菌水配置为 2 mg/mL 储液，B 组分、D 组分及配置为储液的 C 组分， 根据实验需求进行小批量分装。所有检测工作液建议现配现用，避免反复冻融。 | ||||||||||||||||||||||||
| 注意事项 |
1、使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中，我把一个基因的一部分启动子插入到载体中（包含该基因转录起始点），请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变，而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢？比如所包含启动子区域为-1000！~+27（此处是否必须为3的整倍数） woxingwosu 我觉得只要从翻译开始，即ATG， 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
双报告基因系统 在多重发光测试中，信号是同时产生，测试是独立进行。可以测试不同的发光动力学反应或不同的发射光波。可选择的是，反应也可以按顺序被促发，如商业化的Promega公司提供的Renilla和Firefly荧光素酶双报告基因试剂。双报告系统的原理如Figure 1b.双重分析的BL/CL分析采用连续的闪烁型（Flash）发光形式，如发光蛋白水母蛋白和acridinium-9-carboxamide标记。这种方法可以在一个反应管里定量两个分析物和测试两个发光反应。因为它建立
、RNA剪接研究。 萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。Dual-Luciferase®双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故而没有交叉干扰。得益于超强的光
