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T3 in vitro Transcription Kit
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")T3体外转录试剂盒报价,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应T3体外转录试剂盒报价,产品信息:
类别:核酸扩增(PCR)
英文名:T3 in vitro Transcription Kit
产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
T3体外转录试剂盒 | BTN91108 | 50次 |
编号:BTN91108
英文名:T3 in vitro Transcription Kit
规格:50次
产地:国产|进口
本试剂盒是基于沙门氏噬菌体T3 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒,它利用含有T3启动子的模版DNA,以NTP为底物,从T3启动子下游开始合成与模板DNA中一条链互补的RNA,简单快速获得大量的RNA分子。
产品特点:
1. 即开即用,用户只需提供含T3启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验,不需耍单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液,减少加样次数,避免了操作误差,增加了可重复性。
3. 模板DNA可以是线性化的质粒DNA,也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到5000nt之问。
5.产品配方经过精心优化,每μg DNA模板可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA结构研究、核解生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
转录预配液(2×) | 0.5mL |
阳性对照DNA(1.3 Kb片段) | 20μL(10ng/μL) |
T3 RNA聚合酶混合液 | 50μL |
RNase-free水 | 1mL |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板,但是必须注意以下几点:
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA,则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T3启动子。如果模板是PCR产物,则可以在设计引物时将T3启动子序列(5´AATTAACCCTCACTAAAGG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上,则需要选择有T3启动子的载体,并且克隆位点必须位于T3启动子下游。
3)是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒),则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A,因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染,所以在用作模板前,最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温,然后电泳检测RNA是否被降解,以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中,在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分:
成分 | 加入量 | 备注 |
DNA模板 | xμl | 总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段,建议用50ng左右;如果模板是质粒DNA,建议用1μg左右;如果用本产品提供的阳性对照,建议用4μL) |
转录预配液,2× | 10μl | 需室温时使用 |
T3 RNA聚合酶混合液 | 1μl | 本成分还含其他促进剂,所以是混合物 |
RNase-free水 | 补水到20μL |
注:此为20μL反应体系的用量,对其他体积的反应体系,各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针,则需要定做NTP分开而不是NTP预先混合的试剂盒。如果需要得到加帽RNA,则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意:延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活T3 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。
若需进一步去除DNA模板,可参考下列操作步骤,但所用试剂需另行购买,本试剂盒不提供。
1.在体外转录结束后,在反应体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903;3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL,
4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903;用前需要摇晃混匀),振荡后15000rpm离心3~5分钟,弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇,震荡10秒后15000rpm离心3~5分钟,弃上清。
7. 短暂离心数秒,用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟,所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。
疑难解答:
1、没有RNA产物。最常见原因是DNA模板有RNase污染,测试方法是用纯化的RNA跟模板DNA一起保温,再检测RNA是否降解。本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor,如果模板RNase污染严重,可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板序列。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G,在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T3 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6或T7体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6或T7启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T3 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样,有不依赖于模板的加尾功能,最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多,使用的模板又是质粒DNA,则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP,则得到的RNA是三磷酸,体外转录时如果保温时间太长(如12小时),则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP,则T3 RNA聚合酶将优先使用GMP,所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
T3体外转录试剂盒报价专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
关键词:BTN91108,T3 in vitro Transcription Kit,T3体外转录试剂盒
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编号 | 类别 | 名称 |
BTN100210 | 探针标记及检测 | dNTP溶液(标记专用) |
BTN130660 | 工具酶 | ATP硫*(代"酸")化酶 |
BTN101005 | 核酸扩增(PCR) | 即用型易错PCR试剂盒 |
BTN130871 | 蛋白质研究 | 一站式MBP标签蛋白纯化套装 |
BTN100307C | DNA纯化 | 酸洗玻璃珠(400μm) |
BTN130620 | 工具酶 | Poly(U)聚合酶 |
BTN100805C | RNA纯化 | 酸酚-*仿-异戊醇混合液(RNA提取用) |
BTN60911 | DNA纯化 | 硅胶膜离心吸附柱系列(小量提取) |
BTN100883 | 其他生化试剂 | 5M异硫*酸胍溶液(RNase-free) |
BTN130543 | 蛋白质研究 | α2巨球蛋白 |
BTN131069 | 蛋白质研究 | 还原剂兼容型BCA蛋白定量试剂盒 |
BTN121002 | 核酸电泳和回收 | 绿如蓝核酸染料(可见光型) |
BTN81224 | 蛋白质研究 | BCIP/NBT显色试剂盒 |
BTN121112 | 克隆与表达 | 大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞 |
BTN3150 | 核酸电泳和回收 | RNA电泳液,10× |
BTN120511 | 工具酶 | CpG甲基转移酶(M.SssI) |
BTN130920 | 核酸扩增(PCR) | dITP溶液(100mM) |
BTN130632 | 工具酶 | T7核酸外切酶 |
BTN101121 | RNA纯化 | 软骨RNA柱式提取试剂盒 |
BTN90603A | 探针标记及检测 | 随机引物法DNA探针标记试剂盒 |
BTN130599 | 细胞及免疫学 | β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒 |
BTN70804 | DNA纯化 | 一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒 |
BTN140650 | 蛋白质研究 | 3mL亲和层析柱 |
BTN51104 | 克隆与表达 | B载体 |
BTN81216 | 蛋白质研究 | 核酸清除剂 |
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