C58C1 感受态细胞100ul*10

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
C58C1 感受态细胞100ul*10	100ul*10	发根农杆菌感受态细胞

C58C1 感受态细胞100ul*10注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
CSNK1A1 Others Human 人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 铜标准溶液(100µg/mL,基体:1%HNO3)Copper solution质量规格：100µg/mL,基体:1%HNO3
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞;PC-12 [PC12]钴标准溶液(1000μg/ml)Cobalt standard质量规格：1000μg/ml
MDA-MB-231细胞，癌细胞 人肝癌细胞,Bel-7402细胞 CL-00086T-CEM (人T细胞白血病细胞)5×106cells/瓶×2六价铬标准溶液(1000μg/ml，溶剂：水) Chromium Standard质量规格：1000μg/ml，溶剂：水
仓鼠源细胞铒标准溶液(1000μg/ml,基体:1.0 mol/L HNO3)Erbium standard质量规格：1000μg/ml,基体:1.0 mol/L HNO3
CDH8 Others Human 人 Cadherin-8 人细胞裂解液 (阳性对照) 金标准溶液(100.0μg/g,基体: 0.5mol/L的HCl溶液)Gold solution质量规格：100.0μg/g,基体: 0.5mol/L的HCl溶液
CTSD Others Human 人 Cathepsin D / CTSD 人细胞裂解液 (阳性对照) Ac-rC亚1酰胺单体Ac-rC Phosphoramidite质量规格：>98%,BR
DLD-1 人结直肠腺癌上皮细胞Rp-腺苷 3′,5′-环单硫代1酸酯钠盐Rp-Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate, Sodium Salt 质量规格：美国进口
CMVECs微血管内皮细胞 CMVECs micro vascular endothelial cells DMEM+10%FBSSp--腺苷 3′,5′-环单硫代1酸酯 三乙基铵盐水合物Sp-Adenosine 3',5'-cyclic monophosphorothioate triethylammonium salt hydrate 质量规格：美国进口
TNFSF12 Protein Rat 重组大鼠 TNFSF12 蛋白 (Fc 标签)2-甲基硫代二1酸腺苷2-(Methylthio)adenosine 5'-diphosphate 3sodium salt hydrate 质量规格：美国进口
人小梁网细胞(HTMC)(5×105) 3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞 Mouse腺苷-2',3'-环1酸 三乙基铵盐Adenosine 2',3'-Cyclic Phosphate Triethylammonium Salt 质量规格：美国进口
脱氢阿立哌唑盐酸盐  Dehydro Aripiprazole Hydrochloride  质量规格：美国进口 真菌格莫瑞六omori'sMethenamineSilver;GMS)银染试剂盒50
阿立哌唑-d8  Aripiprazole-d8  质量规格：美国进口 正常人体肾组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升
阿立哌唑-d8 (丁基-d8)  Aripiprazole-d8 (Butyl-d8)  质量规格：美国进口 脂蛋白脂酶活性比色法定量检测试剂盒20
阿扎那韦-标记d4  Atazanavir - Labeled d4  质量规格：美国进口 脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)活性荧光定量检测试剂盒20
4'-羟基托莫西汀  4'-Hydroxy Atomoxetine  质量规格：美国进口 脂质过氧化物4-羟基壬烯酸(4-HNE)ELISA定量测定试剂盒48/96
去甲基托莫西汀盐酸盐  Desmethyl Atomoxetine Hydrochloride  质量规格：美国进口 脂质过氧化物亚油酸(linoleicacid)ELISA定量测定试剂盒48/96
ent S-(+)-盐酸托莫西汀  ent S-(+)-Atomoxetine Hydrochloride  质量规格：美国进口 脂质过氧化物异构前列腺素(ISOPROSTANE)高效液相色谱(HPLC)分析试剂盒20
外消旋盐酸托莫西汀  rac Atomoxetine Hydrochloride  质量规格：美国进口 直肠肿瘤标记K-ras粪便检测突变荧光分析试剂盒50
4'-羟基托莫西汀β-D-葡萄糖苷酸  4'-Hydroxy Atomoxetine β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口 直接细胞克隆两步法逆转录PCR试剂盒100
阿托伐醌-d4  Atovaquone-d4  质量规格：美国进口 植物/ATP酶(Na+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒20
C58C1 感受态细胞100ul*10真菌/酵母总巯基含量比色法定量检测试剂盒20 (R)-氨氯地平  (R)-Amlodipine  质量规格：美国进口
真菌NADPH氧化酶活性比色法定量检测试剂盒20(10样本) 阿瑞匹坦-标记d4  Aprepitant - Labeled d4  质量规格：美国进口
真菌格兰-韦革氏(Gram-Weige)染色试剂盒50 阿瑞匹坦-M3代谢物  Aprepitant-M3 Metabolite  质量规格：美国进口
真菌格mori'sMethenamineSilver;GMS)银染试剂盒50 脱氢阿立哌唑盐酸盐  Dehydro Aripiprazole Hydrochloride  质量规格：美国进口
正常人体肾组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升 阿立哌唑-d8  Aripiprazole-d8  质量规格：美国进口
脂蛋白脂酶活性比色法定量检测试剂盒20 阿立哌唑-d8 (丁基-d8)  Aripiprazole-d8 (Butyl-d8)  质量规格：美国进口
脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)活性荧光定量检测试剂盒20 阿扎那韦-标记d4  Atazanavir - Labeled d4  质量规格：美国进口
脂质过氧化物4-羟基壬烯酸(4-HNE)ELISA定量测定试剂盒48/96 4'-羟基托莫西汀  4'-Hydroxy Atomoxetine  质量规格：美国进口
脂质过氧化物亚油酸(linoleicacid)ELISA定量测定试剂盒48/96 去甲基托莫西汀盐酸盐  Desmethyl Atomoxetine Hydrochloride  质量规格：美国进口
脂质过氧化物异构前列腺素(ISOPROSTANE)高效液相色谱(HPLC)分析试剂盒20 ent S-(+)-盐酸托莫西汀  ent S-(+)-Atomoxetine Hydrochloride  质量规格：美国进口
C58C1 感受态细胞100ul*10操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。