BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细胞100ul*50	100ul*50	表达感受态细胞

BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
CD46 Others Human 人 CD46 人细胞裂解液 (阳性对照) 氧化前胡素(标准品)Oxypeucedanin质量规格：HPLC≥98%，标准品
MAO EBV-转化人淋巴细胞野百合碱（标准品）Crotaline;Monocrotaline质量规格：HPLC≥98%，标准品
CM-H018人成纤维细胞完全培养基100mL野黄芩苷(标准品）Scutellarin质量规格：HPLC≥98%，标准品
SP2/0, 小鼠骨髓瘤细胞野黄芩素(标准品)Scutellarein质量规格：HPLC≥98%，标准品
人肾癌Wilms细胞;G401 大鼠气管平滑肌细胞完全培养基 100mL8-O-乙酰山栀苷甲酯（标准品）8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester质量规格：HPLC≥98%，标准品
CD80 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD80 / B7-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 苯佐卡因-d4Benzocaine-d4质量规格：美国进口
CM-H106人内脏脂肪细胞完全培养基100mL盐酸苯达莫司汀-d5Bendamustine-d5 (major) Hydrochloride质量规格：美国进口
MGC803-GFP细胞，绿色荧光蛋白标记人胃癌细胞 人成骨肉瘤细胞,Saos-2细胞 293来源病毒包装细胞;ΦA-GP苯达莫司汀Bis-mercapturic 酸Bendamustine Bis-mercapturic Acid质量规格：美国进口
Eca-109(人食管癌细胞) 5×106cells/瓶×217-Oxo倍他米17-Oxo Betamethasone质量规格：美国进口
C2 Others Human 人 C2 / Compleme Compone 2 人细胞裂解液 (阳性对照) 倍他米-d5Betamethasone-d5质量规格：美国进口
盐酸平阳霉素（标准品）  Bleomycin A5 Hydrochloride   质量规格：HPLC含量测定 小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA检测试剂盒MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 96T/48T
琥乙红霉素（标准品）  Erythromycin ethylsuccinate  质量规格：杂质检查 小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA试剂盒 ，英文名： GP-MM ELISA Kit
灰黄霉素（标准品）  Griseofulvin  质量规格：含量测定 小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA检测试剂盒Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 96T/48T
Tivantinib(ARQ197)  Tivantinib, ARQ 197  质量规格：>98%，c-Met抑制剂 小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒 ，英文名： GSK ELISA Kit
3-乙氧基－4－羟基（标准品）  Ethyl vanillin  质量规格：系统适应性 小鼠糖原合酶激酶3α(GSK3α)ELISA试剂盒 ，英文名： GSK3α ELISA Kit
2-苯乙酰胺（标准品）  2-Phenylacetamide  质量规格：系统适应性 小鼠套膜蛋白(iNV)ELISA试剂盒 ，英文名： iNV ELISA Kit
依诺沙星(标准品）  Enoxacin  质量规格：含量测定 小鼠特异生长因子/相关因子(TGSF)ELISA试剂盒 ，英文名： TGSF ELISA Kit
[Nle4,DPhe7] a-促黑激素酰胺; 美拉诺坦 I  [Nle4,DPhe7] a-MSH, amide; Melanotan I  质量规格：>95%,BR 小鼠特异生长因子/相关因子(TSGF)ELISA检测试剂盒MouseTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TSGFELISAKit 96T/48T
[Nle8’18,Tyr34]-甲状旁腺激素(1-34) 酰胺 (牛)  [Nle8’18,Tyr34]-pTH (1-34) amide (bovine)  质量规格：>95%,BR 小鼠特异生长因子/相关因子(TSGF)ELISA试剂盒 ，英文名： TSGF ELISA Kit
[Nle8’18,Tyr34]-甲状旁腺激素(3-34) 酰胺(牛)  [Nle8’18,Tyr34]-pTH (3-34) amide (bovine)  质量规格：>95%,BR 小鼠天冬酸基转移酶(AST)ELISA试剂盒 ，英文名： AST ELISA Kit
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细胞100ul*50小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 哌拉西林  Piperacillin  质量规格：>95%,BR
小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA检测试剂盒MouseGlycogenphosphorylaseII,GP-II 96T/48T 邻氯青霉素 ;氯唑西林钠(标准品)  Cloxacillin Sodium Salt Monohydrate  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA试剂盒 ，英文名： GP-II ELISA Kit 邻氯青霉素 ;氯唑西林钠  Cloxacillin Sodium Salt Monohydrate  质量规格：干品Cloxacillin>90%,一水
小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA检测试剂盒MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MM 96T/48T 盐酸平阳霉素（标准品）  Bleomycin A5 Hydrochloride   质量规格：HPLC含量测定
小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA试剂盒 ，英文名： GP-MM ELISA Kit 琥乙红霉素（标准品）  Erythromycin ethylsuccinate  质量规格：杂质检查
小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA检测试剂盒Mouseglycogensyhasekinase,GSK 96T/48T 灰黄霉素（标准品）  Griseofulvin  质量规格：含量测定
小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒 ，英文名： GSK ELISA Kit Tivantinib(ARQ197)  Tivantinib, ARQ 197  质量规格：>98%，c-Met抑制剂
小鼠糖原合酶激酶3α(GSK3α)ELISA试剂盒 ，英文名： GSK3α ELISA Kit 3-乙氧基－4－羟基（标准品）  Ethyl vanillin  质量规格：系统适应性
小鼠套膜蛋白(iNV)ELISA试剂盒 ，英文名： iNV ELISA Kit 2-苯乙酰胺（标准品）  2-Phenylacetamide  质量规格：系统适应性
小鼠特异生长因子/相关因子(TGSF)ELISA试剂盒 ，英文名： TGSF ELISA Kit 依诺沙星(标准品）  Enoxacin  质量规格：含量测定
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细胞100ul*50操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。