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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
22
- 英文名:
M15(pREP4) 感受态细胞
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ul*50
| 产品名称 | 包装 | 分类 |
| M15(pREP4) 感受态细胞100ul*50 | 100ul*50 | 表达感受态细胞 |
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
同一批感受态细胞,用含目的片段的T载体质粒转化(阳性对照)能长出密密麻麻的菌落,而用另一种载体和目的片段的连接产物转化,却一个菌都没长出来,重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关,还是连接出了问题?哪个可能性大些?
答:应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照,确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了,还能用来转化质粒吗?
答:如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况,是可以用来转化的,但是由于冻存时间过长,转化效率会有所下降,如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的,如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
ERAP2 Others Human 人 LRAP / ERAP2 人细胞裂解液 (阳性对照) 普鲁卡因(标准品)Chloroprocaine hydrochloride质量规格:含量测定
原代平滑肌细胞特制基础培养基Many types of cells包装:500/250/100ml盐酸乙哌立(标准品)Eperisone hydrochloride质量规格:含量测定
PDGFRB Others Human 人 PDGFRB / CD140b 人细胞裂解液 (阳性对照) 孕三1酮(标准品)Gestrinone质量规格:含量测定
MDBK (NBL-1) 牛肾细胞西尼地平(标准品)Cilnidipine质量规格:HPLC>97%,标准品
CM-H002人肺大动脉内皮细胞完全培养基100mL西尼地平Cilnidipine质量规格:>97%,BR,可用于细胞培养
人肺癌细胞;A549 [A-549] 人脑成纤维细胞完全培养基 100mL5-O-去甲基奥美拉唑硫化物5-O-Desmethyl Omeprazole Sulfide质量规格:美国进口
人肝窦内皮细胞cDNAHHSEC cDNA奥美拉唑 Omeprazole质量规格:>99%,USP33,BR,可用于细胞培养
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF-mt)(5×105)奥美拉唑 (标准品)Omeprazole质量规格:HPLC>98%,标准品
大鼠肝细胞;IAR20氯唑沙宗Chlorzoxazone质量规格:>98.5%,BR
小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A2 小鼠肝外胆管上皮细胞完全培养基 100mL氯唑沙宗(标准品)Chlorzoxazone质量规格:HPLC>98%,标准品
岩白菜素(标准品) Bergenin 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠碱性0酸酶(ALP)ELISA试剂盒 ,英文名: ALP ELISA Kit
岩白菜素 Bergenin 质量规格:>97%,BR 小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
盐酸巴马汀,盐酸掌叶防己碱(标准品) Palmatine hydrochloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA检测试剂盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit 96T/48T
盐酸巴马汀,盐酸掌叶防己碱 Palmatine hydrochloride 质量规格:HPLC≥97%,BR 小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒 ,英文名: bFGF ELISA Kit
盐酸黄柏碱(标准品) Phellodendrine chloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF/FGF2)ELISA试剂盒 ,英文名: bFGF/FGF2 ELISA Kit
盐酸黄连碱(标准品) Coptisine chloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)ELISA试剂盒 ,英文名: FGF2 ELISA Kit
盐酸石蒜碱(标准品) Lycorine chloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA检测试剂盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISAKit 96T/48T
盐酸甜菜碱(标准品) Betaine hydrochloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
盐酸小檗胺(标准品) Berbamine hydrochloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA检测试剂盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor6,bFGF-6ELISAKit 96T/48T
盐酸益母草碱(标准品) Leonurine hydrochloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA检测试剂盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor9,bFGF-9ELISAKit 96T/48T
M15(pREP4) 感受态细胞100ul*50小鼠剪接因子3B亚基3(SF3B3)ELISA试剂盒 ,英文名: SF3B3 ELISA Kit 新藤黄酸(标准品) Neogambogic acid 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠碱性0酸酶(ALP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 延龄草苷(标准品) Diosgenin glucoside 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠碱性0酸酶(ALP)ELISA检测试剂盒Mousealkalinephosphatase,ALP 96T/48T N-反式-对香豆酰酪胺(标准品) N-p-CouMaroyltyraMine;Paprazine 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠碱性0酸酶(ALP)ELISA试剂盒 ,英文名: ALP ELISA Kit 岩白菜素(标准品) Bergenin 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 岩白菜素 Bergenin 质量规格:>97%,BR
小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA检测试剂盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor,bFGF 96T/48T 盐酸巴马汀,盐酸掌叶防己碱(标准品) Palmatine hydrochloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒 ,英文名: bFGF ELISA Kit 盐酸巴马汀,盐酸掌叶防己碱 Palmatine hydrochloride 质量规格:HPLC≥97%,BR
小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF/FGF2)ELISA试剂盒 ,英文名: bFGF/FGF2 ELISA Kit 盐酸黄柏碱(标准品) Phellodendrine chloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)ELISA试剂盒 ,英文名: FGF2 ELISA Kit 盐酸黄连碱(标准品) Coptisine chloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA检测试剂盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4 96T/48T 盐酸石蒜碱(标准品) Lycorine chloride 质量规格:HPLC≥98%,标准品
M15(pREP4) 感受态细胞100ul*50操作方法:
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
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文献和实验之前已分别构筑出GUS 基因的表现质体pQG11,若要令启动子T5promotor 的启动受到更好的调控,应进一步将pQG11 转形至大肠杆菌M15[pREP4]. M15[pREP4] 可持续表现lac repressor,pQG11 上用以驱动GUS基因表现的T5 promoter 的活性将因而受到抑制,但一旦加入IPTG 就能诱导GUS基因大量表现。 在这一节的实验里,我们将分别自经IPTG 诱导与未经诱导的pQG11/M15[pREP4] 菌体抽取total RNA,以便以北方杂合反应
(see table). Expression vector appropriate host strain pBAD vectors Top10, LMG194 pET vectors BL21 (DE3) pGEX vectors BL21 pMal vectors BL21, TB1 pProEx vectors BL21, DH10B pQE vectors M15 or M15 [pREP4] pRSET vectors BL21 (DE3) pLysS
蛋白是相当重要的;同时可以纯化出那些完整表达的蛋白,一些在翻译过程中容易造成“暂停”现象的蛋白就不用怕纯化产物里含有不完整的产物。融合了6×组氨酸标签的有pQE-60和pQE-70,融合了6×His-DHFR的有pQE-16。 顺式抑制载体 pQE系列的表达载体一般情况下需要在M15菌株中进行表达的,但是设计的pQE80L系列就没有这种约束,它可以在任意大肠杆菌株中进行表达。这与一般的pQE载体利用M15中质粒pREP4的反式lacI抑制子调控不同,它是利用顺式lacIq调控产生大量lac抑制
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