F-DH5α 感受态细胞100ul*20

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
F-DH5α 感受态细胞100ul*20	100ul*20	克隆感受态细胞

F-DH5α 感受态细胞100ul*20注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
人急性T淋巴细胞白血病细胞;Jurkat, Clone E6-1异鲁米诺(>98.0%(HPLC)(T))Isoluminol质量规格：>98.0%(HPLC)(T)
IL18R1 Others Mouse 小鼠 IL18R1 / CD218a 人细胞裂解液 (阳性对照) 草酸双[2,4,5-三氯-6-(戊氧羰基)苯基]酯(>98.0%(HPLC))Bis[3,4,6-trichloro-2-(pentyloxycarbonyl)phenyl] Oxalate质量规格：>98.0%(HPLC)
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA8-氨基-1,3,6-萘三磺酸二钠盐水合物(>99.0%(HPLC)(T))Disodium 8-Amino-1,3,6-naphthalene 3sulfonate Hydrate质量规格：>99.0%(HPLC)(T)
ROBO2 Others Human 人 ROBO2 人细胞裂解液 (阳性对照)  102(>97.0%(HPLC)(N))Coumarin 102质量规格：>97.0%(HPLC)(N)
淋巴成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml) 314(>98.0%(HPLC)(N))Coumarin 314质量规格：>98.0%(HPLC)(N)
人胚肺二倍体细胞;HL橙皮苷(标准品）Hesperidin质量规格：HPLC≥98%，标准品
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 橙皮苷Hesperidin质量规格：HPLC≥90%,BR
人间充质干细胞-骨髓总RNAHMSC-bm NA橙皮素(标准品)Hesperitin质量规格：HPLC≥98%，标准品
PARP1 Others Mouse 小鼠 PARP-1 / PARP 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 虫草素(标准品)Cordycepin质量规格：HPLC≥98%，标准品
家猫肺细胞;FCA-L1川陈皮素;蜜橘黄素Nobiletin质量规格：HPLC≥98%,BR
异蒽酮紫  Isoviolanthrone  质量规格： 小鼠原肌球调节蛋白3(TMOD3)ELISA试剂盒 ，英文名： TMOD3 ELISA Kit
2-甲基环戊[I]菲(>97.0%(GC))  2-Methylcyclopenta[l]phenanthrene  质量规格：>97.0%(GC) 小鼠原激活的蛋白激酶/MAP激酶(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)ELISA试剂盒 ，英文名： Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1 ELISA Kit
萘[2,3-a]芘(>98.0%(GC))  Naphtho[2,3-a]pyrene  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ，英文名： PROG ELISA Kit
2-氯吩噻嗪(>98.0%(GC))  2-Chlorophenothiazine  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠孕酮(Pg)ELISA试剂盒 ，英文名： Pg ELISA Kit
2-氯-4,6-二苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))  2-Chloro-4,6-diphenyl-1,3,5-triazine  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ，英文名： PROG ELISA Kit
阴丹酮  Indanthrone  质量规格： 小鼠孕酮受体(PROGR)ELISA试剂盒 ，英文名： PROGR ELISA Kit
久洛尼定(>97.0%(GC)(T))  Julolidine  质量规格：>97.0%(GC)(T) 小鼠载脂蛋白A1(Apo A1)ELISA试剂盒 ，英文名： Apo A1 ELISA Kit
9-醛基久洛尼定(>98.0%(GC))  9-Julolidinecarboxaldehyde  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA检测试剂盒Mouseapoprotein,apo-A1ELISAKit 96T/48T
9,10-菲醌(>99.0%(GC))  9,10-Phenanthrenequinone  质量规格：>99.0%(GC) 小鼠载脂蛋白A1(APOA1)ELISA试剂盒 ，英文名： APOA1 ELISA Kit
菲啶(>98.0%(GC))  Phenanthridine  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒 ，英文名： apo-A1 ELISA Kit
F-DH5α 感受态细胞100ul*20小鼠诱导型合酶(NOS2)ELISA试剂盒 ，英文名： NOS2 ELISA Kit 二苯并[b,def]芘(>98.0%(GC))  Dibenzo[b,def]chrysene  质量规格：>98.0%(GC)
小鼠诱导型一氧化合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 ，英文名： iNOS ELISA Kit 1,2:8,9-二苯并五苯  1,2:8,9-Dibenzopentacene  质量规格：
小鼠原钙黏素15(PCDH15)ELISA试剂盒 ，英文名： PCDH15 ELISA Kit 二苯并[g,p]稠二萘(>98.0%(HPLC))  Dibenzo[g,p]chrysene  质量规格：>98.0%(HPLC)
小鼠原肌球调节蛋白3(TMOD3)ELISA试剂盒 ，英文名： TMOD3 ELISA Kit 异蒽酮紫  Isoviolanthrone  质量规格：
小鼠原激活的蛋白激酶/MAP激酶(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)ELISA试剂盒 ，英文名： Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1 ELISA Kit 2-甲基环戊[I]菲(>97.0%(GC))  2-Methylcyclopenta[l]phenanthrene  质量规格：>97.0%(GC)
小鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ，英文名： PROG ELISA Kit 萘[2,3-a]芘(>98.0%(GC))  Naphtho[2,3-a]pyrene  质量规格：>98.0%(GC)
小鼠孕酮(Pg)ELISA试剂盒 ，英文名： Pg ELISA Kit 2-氯吩噻嗪(>98.0%(GC))  2-Chlorophenothiazine  质量规格：>98.0%(GC)
小鼠孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ，英文名： PROG ELISA Kit 2-氯-4,6-二苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))  2-Chloro-4,6-diphenyl-1,3,5-triazine  质量规格：>98.0%(GC)
小鼠孕酮受体(PROGR)ELISA试剂盒 ，英文名： PROGR ELISA Kit 阴丹酮  Indanthrone  质量规格：
小鼠载脂蛋白A1(Apo A1)ELISA试剂盒 ，英文名： Apo A1 ELISA Kit 久洛尼定(>97.0%(GC)(T))  Julolidine  质量规格：>97.0%(GC)(T)
F-DH5α 感受态细胞100ul*20操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。