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rAAV-EF1α-DIO-hM4D(Gi)-mCherry-WPREs
- 供应商:
BrainVTA
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详见说明
EF1α:elongation factor 1-alpha,人类靶向延长因子,广谱性强启动子。
DIO:Double-floxed inverse Orientation, 是和Cre重组酶配合控制目的基因表达的元件。如果没有Cre重组酶的话目的基因不表达,在有Cre 的情况下目的基因才能开始表达。
mCherry:红色荧光蛋白,激发波长587nm,发射波长610nm。
hM4D(Gi):hM4D(Gi)是从人毒蕈碱乙酰胆碱受体M4 上改造的仅对CNO(clozapine-N-oxide)有反应的人工受体(designer receptors exclusivelyactivated by designer drugs,DREADD),不再受乙酰胆碱激活。在一些神经元里,CNO 结合hM4D 后,激活Gi 蛋白偶联的内向钾离子通道GIRK,使得细胞膜超极化,抑制神经元细胞动作电位发放。在不表达GIRK 或是Gi 的细胞中,hM4D 的功能会有所不同。
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100ul 苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提,并沉淀出cDNA双链,溶解于50ul双蒸水中。三、cDNA质量检测根据一个油菜线粒体基因Ccl1(GI:1694628)的cDNA序列设计特异性引物(CF:5′-TGA CAC GAG ATG ATA AAG A-3′ CR:5′-CGT AAC AAT AGA GCA GGA TAG-3′),目标片段大小为427bp。以反转录所得cDNA为模板,若PCR扩增能得到目标片段,说明线粒体mRNA已经成功反转录。四、Rsa I酶切双链cDNA
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