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文献和实验常见表位标签和序列常用表位标签的生物化学特性总结如下:氯霉素乙酰转移酶(CAT)这个 24kDa 大小的标签也用作报道基因,与大多数蛋白质融合时依然能保留其活性。这意味着它可以用来直接测量表达水平,而不需要 PAGE 或免疫检测。二氢叶酸还原酶(DHFR)这个 25kDa 蛋白质参与胸苷生物合成途径。带有这个标签的蛋白质的纯化可以通过甲氨蝶呤连接的树脂实现。FLAG带电的八肽序列(DYKDDDDK),可用于蛋白检测,特别是在串联为 3xFLAG™表位(DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDK
,或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α(+)载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统,可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价,快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大,因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中,我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α(+)载体的构建,蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应(PCR
缓冲液。这6种蛋白抽提缓冲液皆源自对可靠而有效的蛋白抽提缓冲液的升级改良,以求进一步提高2D凝胶分析中的点分辨率。而哺乳动物 细胞蛋白抽提液采用温和的去垢剂,可以用于贴壁细胞和悬浮细胞的蛋白抽提;酵母蛋白抽提试剂盒无需玻璃珠,采用酶法温和抽提酵母细胞可溶性蛋白,抽提的蛋白可保持生物活性。 在双向电泳方面,新品辈出啊。首先是IPG胶条改良了,稳定性、重复性和蛋白点清晰度更佳。IPG缓冲液的配方同时也改进了。另外,还要欢迎Ettan 2D系统中的两个新成员:IPGbox™ 和IPGbox
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