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文献和实验最近 WB 的结果趋势不是很理想,因为给了蛋白 B 的抑制剂蛋白 B 却没有明显变化。于是大伙儿一合计,可能需要再看看蛋白质之间的相互作用,会不会是抑制剂影响了蛋白 B 和蛋白 C 之间的结合,而不是直接导致蛋白 B 的降解。 大家都知道研究蛋白质相互作用的三大经典方法是:酵母双杂交(Y2 H),免疫共沉淀(CoIP)和 GST pulldown。结合我们课题组的这个实验,因为只需看看蛋白 B 和 C 之间的结合,而且已知蛋白 B 和 C 是会结合的,所以可能用 CoIP 最简便
干燥。以上三种方法的共同问题是操作繁琐,产量低。 C. 离心管柱提取法: 这种方法利用了一种新的蛋白质提取技术,脂肪组织通过无表面活性剂的缓冲液匀浆,水油乳状液通过简单的冷冻后,离心使其通过特殊的离心管柱(有孔径,表面性质被处理过的)提取。离心管柱的作用是快速,干净的从油相中分离出水相蛋白。Invent Biotechnologies Inc 公司利用专利技术生产的这种脂肪蛋白提取试剂盒可以从脂肪组织中提取全部的总蛋白,产量远远高于其他方法。 推荐产品:Minute™ Total
常见表位标签和序列常用表位标签的生物化学特性总结如下:氯霉素乙酰转移酶(CAT)这个 24kDa 大小的标签也用作报道基因,与大多数蛋白质融合时依然能保留其活性。这意味着它可以用来直接测量表达水平,而不需要 PAGE 或免疫检测。二氢叶酸还原酶(DHFR)这个 25kDa 蛋白质参与胸苷生物合成途径。带有这个标签的蛋白质的纯化可以通过甲氨蝶呤连接的树脂实现。FLAG带电的八肽序列(DYKDDDDK),可用于蛋白检测,特别是在串联为 3xFLAG™表位(DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDK
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