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文献和实验一、线粒体膜电位检测原理 线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件,发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体膜电位崩溃,细胞凋亡便不可逆转。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态,两者发射光谱不同。在正常细胞内,线粒体膜电位较高,JC-1聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可产生红色荧光;凋亡早期,线粒体膜电位降低,JC-1不能聚集在线粒体基质中,此时JC-1为单体
rhodamine methyl ester(TMRM)等可结合到线粒体基质,其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。 一、方法将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123(1mM)或终浓度为DiOC6(25nM),JC-1(1mM),TMRM(100nM),37°C平衡30min,流式细胞计检测细胞的荧光强度。 二、注意事项1、始终保持平衡染液中pH值的一致性,因为pH值的变化将影响膜电位。 2、与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白,他们将与部分染料结合,降低
线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位DYmt的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体DYmt崩溃,则细胞凋亡不可逆转。线粒体跨膜电位的存在,使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro
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