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- siRNA载体构建技术服务
- 上海 徐汇
- 2026年01月16日
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- 服务名称：
siRNA质粒载体/microRNA/过表达载体/稳转细胞株
- 提供商：
上海英拜生物科技有限公司
1. siRNA表达载体的选用：
本公司选用的siRNA表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp 抗性基因，可以无限扩增。
2. 设计siRNA 靶序列
A、根据目的mRNA序列，设计3 条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19－21nt长。
B、对于每条选定的siRNA靶序列，设计siRNA正义链和反义链，以loop(9nt)相连，称为shRNA（short hairpin RNA）。
3. 合成模板：
合成每条编码shRNA的DNA 模板的两条单链，退火DNA 单链得到shRNA的DNA双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点， 同时两端分别设计BamHI和HindIII酶切位点， 可以克隆到siRNA载体多克隆位点的BamHI 和 HindIII酶切位点之间。
4. siRNA空载体用BamHI 和 HindIII双酶切后，1％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。
5. 连接与转化：
把退火的DNA 模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为3：1。连接产物转化DH5α 大肠杆菌，在LB Amp培养基上涂板，37℃培养过夜。
6. PCR鉴定：
挑取转化的菌落PCR，2％琼脂糖凝胶电泳鉴定具有shRNA编码序列的阳性克隆（图例）。
7.测序鉴定：
对PCR鉴定阳性的克隆再进行测序鉴定，确定shRNA编码框架和模板序列正确无误(图例)。
8. 柱抽提阳性克隆载体并定量。
siRNA 序列的siRNA™试剂盒包括：
√ 3条编码shRNA的载体（各10µg）,保证其中一条siRNA 序列的有效.
√ 1条编码阴性对照shRNA的载体（10µg）
采用的阴性对照是通用序列，在人和小鼠的基因组中都没有同源位点；
√ 大肠杆菌DH5α菌株
√ siRNA载体的构建、鉴定记录及使用说明。
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文献和实验a look from the following website just by clicking "Tyrosine Phosphorylation and Dimerization" http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WSN-43F85YV-2&_user=1111158&_coverDate=06%2F29%2F2001&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search
扫描仪中，都采用机械式的二维X，Y线性扫描技术实现，即X，Y方向都采用直线驱动器和直线导轨实现往复运动。此类装置，由于驱动系统的频率限制，驱动器的扫描惯性大，使得扫描效率低，分析时间相当长；并且往复行程长，对直线导轨的精度要求相当高。二、光机结合的二维扫描系统为同样实现生物芯片的二维扫描，我们的实验装置设计如图2，采用了振镜和大数值孔径的远心f-è物镜相结合实现X方向扫描，Y方向的运动仍采用直线驱动器和直线导轨实现。 系统中，对于f-è物镜，满足x＝2fè（è为振镜的摆动角度，f为物镜焦距）的线性
Analysis of RB Action in DNA Damage Checkpoint Response
checkpoint response: (1) transcriptional repression of E2F-regulated genes (cyclin A reporter assay); (2) induction of cell cycle arrest (Brd-U incorporation assay); and (3) inhibition of DNA double-strand break accumulation (phosphorylated-histone H2A.X
