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- 详细信息
- 文献和实验
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123
- 英文名:
T4 Polynucleotide Kinase
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
500U|2500U
特别提示:包括T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)
英文名称:T4 Polynucleotide Kinase
产品货号:WE0237
产品规格:500U|2500U
T4多聚核苷酸激酶,是由大肠杆菌表达,表达基因的来源为T4嗜菌体,可以催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷间进行转移和交换,同时还具有3’磷酸酶活性,能将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。该T4多聚核苷酸激酶可用于寡核苷酸、DNA或RNA的5’末端标记或磷酸化;催化3’磷酸化的单核苷酸5’磷酸化以及去除3’端磷酸基团等。本品于75℃加热10分钟可使其失活,加入EDTA也可使其失活,金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50 mM的KCl和NaCl均可显著抑制其活性。
我公司销售的T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)价格,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验用 T4 标记的 5’ 末端 1. 无菌的 1.5ml 为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分: 50 pmol 合成的寡核苷酸 2.5 μ l 10 ×反应缓冲液 10 μ l γ -[32 P]ATP ( 33pmol ) 1.5 μ l T4 多核苷酸激酶( 15U ) 灭菌双蒸水加至 25 μ l 2. 37 ℃温育 30min 。 3. 当反应物正温育时,以 2000 × g 离心 2min 制备
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
液: 1X T4 DNA Ligase Buffer: [50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 µg/ml BSA, (pH 7.5 @ 25°C)]。推荐DNA浓度(0.1 - 1 µM 的5′末端)。 使用注意:ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接酶不同。 如在反应体系中补加1 mM的ATP,连接反应还可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffers)或在T4 DNA多聚核苷酸激酶
。在这些情况下,仅有约10%的放射性标记物被转移,但实际上每个寡核苷酸分子都被标记。 2) 在反应混合液中加入8单位(约1 μl)T4噬菌体多核苷酸激酶。 充分混匀,于37 ℃温育45分钟。人该反应液中另取0.5 μl 加至另一装有10 10mmol/LTris.Cl(pH8.0)的反应管中,搁置一旁留备步骤3)使用。于68 ℃将其余的反应液加热10分钟,以灭活T4噬菌体多核苷酸激酶。 3) 按下列方法(Stawinski等,1977;Narang等,1980
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