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- 百奥莱博
- BTN140374-FIR
- 北京
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
450
- 英文名：
E.coli DH10B Chemical Competent Cell
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
0.1mL*10
特别提示：包括大肠杆菌DH10B化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：大肠杆菌DH10B化学感受态细胞
英文名称：E.coli DH10B Chemical Competent Cell
产品货号：BTN140374
产品规格：0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌DH10B菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。
产品特点：
1. 使用 pUC19质粒检测，转化效率可达10，-80℃保存几个月转化效率不发生改变。
2.可用于高效转化150Kb大小的质粒，可用于蓝、白斑筛选。
3. DH10B菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr -hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG
4. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
我公司销售的大肠杆菌DH10B化学感受态细胞报价，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验相关专题 准备工作： ①制做选择平板LB+25 mg/l Kan。 ②核对好要转化的质粒 DNA，在15 ml Falcon tube 和cuvette（电转化用的石英样品槽，两面磨光，两面磨砂）标好质粒名称。将Falcon tube、cuvette、质粒DNA、SOC培养基按顺序对应置于冰上预冷或解冻。转化前将大肠杆菌（45 µl aliquot of E. coli DH10B Cell s）置于
体外连接的DNA重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。为了提高受体菌摄取外源DNA的能力，提高转化效率以获得更多的转化子，人们摸索出了不同的方法处理细菌，使其处于感受态。目前主要采用电转化法和CaCl2法将外源DNA导入受体细胞中，并需要相应地制备电转化感受态细胞和CaCl2感受态细胞。实验目的：学习感受态细胞的制备过程实验材料：大肠杆菌菌株DH5a或DH10B实验原理：电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电
样（比如 GeneArt EX 超长版就建议用 DH10B 电转感受态细胞）。市面上有多种为满足不同需求而优化条件的商品化组装克隆试剂盒，可以根据自己的需求选出最合适自己需要的——选对合适的 Kit ，每天都是好心情，实验高歌猛进充满成就感；选不合适就只能天天 re-search 了——反反复复来来回回(re-)地摸索(search)尝试，挺折磨的。选择kit时一般留意几个参数：插入片段长度，单次反应可插入片段数量，同源序列长度——即合成引物时要求添加的载体同源序列长度，反应时间，当然还有克隆效率（几个领先品牌的产品
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