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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
54
- 英文名:
FFPE DNA Extraction Kit with Magbead
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
RT(15-30℃)
- 规格:
96次
特别提示:包括磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒
英文名称:FFPE DNA Extraction Kit with Magbead
产品货号:WE1002
产品规格:96次
本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法。实验过程中可采取无毒的去蜡剂去除石蜡,降低实验过程中对实验者的危害。组织裂解后,DNA结合于硅基包被磁珠表面。漂洗后,高纯度的DNA洗脱于EB或去离子水中。DNA的得率、片段大小与样品类型,及储存条件、时间有很大关系。提取得到的DNA可用于定量PCR、二代测序建库等下游检测。
试剂盒组成:
| 组分 | 规格 |
| Buffer DS | 48ml |
| Buffer WL | 36ml |
| Buffer ML | 24ml |
| Buffer GW1(concentrate) | 80ml |
| Buffer GW2(concentrate) | 50ml |
| Buffer EB | 30ml |
| Proteinase K | 2×25mg |
| Proteinase K Storage buffer | 2×1.25ml |
| Magbeads PN | 1ml |
保存条件:室温(15-30℃)。
自备试剂:无水乙醇、异丙chún
实验前准备及重要注意事项:
1.向25 mg Proteinase K*末中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer,涡旋震荡混匀使其充分溶解,之后-20℃保存备用。
2.第一次实验前按照试剂瓶标签上的说明向Buffer GW1和Buffer GW2中加入指定用量的无水乙醇。
3.Magbeads PN严禁冰冻和高速离心,否则可能会对Magbeads PN造成不可逆的损害。
操作方法:
石蜡去除(方案一二jiǎ苯法)
1.用刀片去除组织周围多余石蜡,之后切取5-8片5-10μm的石蜡卷放入1.5 ml离心管中。
2.向离心管中加入1 ml二jiǎ苯,涡旋震荡10秒使石蜡充分溶解。
3.16,000×g离心2分钟,之后吸弃溶液,小心沉淀丢失。
4.向离心管中加入1 ml无水乙醇,涡旋震荡10秒。
5.16,000×g离心2分钟,之后吸弃溶液,小心沉淀丢失。
6.打开管盖,室温放置10分钟使乙醇充分挥发。
石蜡去除(方案二无毒脱蜡法)
1.用刀片去除组织周围多余石蜡,之后切取5-8片5-10μm的石蜡卷放入1.5 ml离心管中。
2.向离心管中加入400μlBuffer DS,56℃孵育2分钟后立即涡旋震荡10秒钟使石蜡充分溶解,之后继续孵育2分钟。
3.离心管孵育后立即16,000×g离心2分钟,之后吸弃溶液,小心沉淀丢失。
4.向离心管中加入1 ml无水乙醇,涡旋震荡10秒钟后56℃孵育2分钟。
5.16,000×g离心2分钟,之后吸弃溶液,小心沉淀丢失。
6.重复步骤4-5。
7.打开管盖,室温放置10分钟使乙醇充分挥发。
提取步骤:
1.向离心管中加入20 μl Proteinase K和300 μl Buffer WL,之后将离心管固定于56℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡裂解1小时,直至样品完全溶解。
2.将离心管放于90℃的恒温混匀仪上孵育1小时。
3.将离心管从恒温混匀仪上取下,平衡至室温后短暂离心,之后加入200 μl Buffer ML并涡旋震荡混匀。
4.向离心管中加入300 μl异丙chún与10 μl磁珠后涡旋震荡混匀5秒钟,之后将离心管固定于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合5分钟。
5.将离心管固定于磁力架上静置1分钟,之后弃去溶液。
6.向离心管中加入750 μl Buffer GW1(使用前请检查是否已加入无水乙醇),涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
7.将离心管固定于磁力架上静置1分钟,之后弃去溶液。
8.重复步骤6-7。
9.向离心管中加入750 μl Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇),涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
10.将离心管固定于磁力架上静置1分钟,之后弃去溶液。
11.重复步骤9-10。
12.离心管短暂离心后,将其重新固定于磁力架上用移液器去除管底溶液,之后室温放置5-10分钟使乙醇充分挥发。
13.向离心管中加入50-200 μl Buffer EB后涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中,之后将离心管固定于56℃、1600rpm的恒温混匀上震荡洗脱10分钟。
14.将离心管固定于磁力架上静置2分钟,之后将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。
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文献和实验wymderek 本人目前在做肺癌基因检测,靶标方面的研究,手上的标本均为05---08年肺穿刺、气管镜的组织标本,既往曾经过福尔马林固定,石蜡包埋等处理,切片后行LCM(显微切割)选出肿瘤区域。 小片组织细胞数约为50个细胞,我们的后续方法为从这样的标本组织中提取DNA(应用蛋白酶水解过夜,在蛋白酶失活方法,经过验证新近标本,均可成功),然后巢式PCR扩增,最后测序比对可能出现的突变或者缺失。 我们检测的基因为EGFR
石蜡包埋组织切片 miRNA 提取试剂盒(DP502) 操作指南
以下操作按照天根产品 DP502 石蜡包埋组织切片 miRNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 石蜡切片或石蜡块样本2. 无水乙醇,二甲苯3. 移液器及配套RNase-Free无菌枪头(200 μl ,1 ml); 1.5 ml,2.0 ml 离心管(RNase-free)4. 涡旋振荡器,台式低温离心机,金属浴/水浴本文版权归天根生化科技(北京)有限公司所有,仅供个人学习使用
以下操作按照天根产品 DP330 石蜡包埋组织 DNA 快速提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 石蜡切片或石蜡块2. 无水乙醇3. 移液器及配套无菌枪头(10 μl, 200 μl ,1ml),1.5 ml 离心管4. 涡旋振荡器,金属浴/水浴,台式离心机实验准备-试剂盒准备:使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。本文版权归天根生化科技(北京)有限
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