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MSCgo™间充质干细胞成脂诱
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05-330-1-1B/05-331-1-01/05-332-1-15
货号:05-330/05-331/05-332
规格:100ml
产品名称:MSCgo™间充质干细胞成脂诱导分化试剂产品描述MSCgo™间质干细胞成脂诱导分化培养基试剂盒,不含血清,无异源,适用于不同来源的MSC,如骨髓、脂肪组织和脐带组织;hMSC-BM,hMSC-AT,hMSC-CT 成脂结果倒置显微镜观测到脂滴累积形成球形细胞,表明hMSC分化成脂。使用不同的hMSC(细胞类型、年龄、代数)得到的分化细胞数量也不一样。 试剂盒组成MSCgo™间质干细胞成脂诱导分化培养基试剂盒
试剂配制1 室温下解冻2个Supplement Mix。2 将0.1ml Supplement Mix I与 1.5ml Supplement Mix II 加入到100ml Adipogenic Basal Medium 中,于2-8°C储存。3 完全培养基可在2-8°C储存一个月。 所需材料BI: 05-330-1 ,05-331-1,05-332-1• MSC NutriStem® XF : BI;05-200-1,05-201-1• MSC Attachment solution XF : BI;05-752-1• 可选: Oil Red O,Sigma;O0625 成脂诱导分化操作接种hMSC1 用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘,每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF,接种6x104 细胞 (3x104 cells/cm2)。注意:若使用其他培养器皿,请适当调整体积。2 置于37°C,5% CO2 培养箱中培养。 分化1 培养24h后即细胞融合度达到80-90%时,将MSC NutriStem® XF 培养基吸除,每孔加入0.5ml分化培养基。注意:若细胞融合度<80%,继续再培养一天。2 置于37°C,5% CO2 培养箱中培养14-21天,参照以下建议的替代培养基。 根据hMSC类型的替代培养基方法不同来源的hMSC具有不同的多向分化潜能。例如,hMSC-AT需要较短的诱导期(~ 6天),而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天诱导期。注意:l 对于所有不同类型的hMSC,诱导成脂后建议使用维持培养基。l 避免将液体直接加入到脂肪细胞上,需要非常小心移液,因为脂肪细胞是脆弱的。 hMSC-AT:一个分化周期/维持培养基l 6-8天使用完全成脂分化培养基,建议每3-4天换液。l 成脂诱导完成后,用维持培养基(MSC NutriStem® XF(05-200-1,05-201-1 ,BI))替代分化培养基,培养3-4天。 hMSC-BM:一个分化周期/维持培养基l 8-12天使用完全成脂分化培养基,建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。l 成脂诱导完成后,用维持培养基(MSC NutriStem® XF (05-200-1,05-201-1 ,BI))替代分化培养基,培养3-4天。 hMSC-CT:至少两个分化周期/维持培养基l 5-10天使用完全成脂分化培养基,建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。l 成脂诱导完成后,用维持培养基(MSC NutriStem® XF (05-200-1,05-201-1)替代分化培养基,培养3-6天,每2-4天换液。l 重复培养周期直到观测到成熟脂肪细胞(即脂滴的形成)。Oil red-O 染色分析 (可选)Oil red-O 用于染色脂滴。 Oil red-O 染色储存液制备l 将0.35g Oil Red-O (Sigma;O0625) 溶解到100ml 99%异丙醇中。l 用0.2 或 0.45 μm PTFE 滤膜(如:Minisart SRP 17575)过滤。l 溶液置于2-8°C储存一年。 Oil red-O 染色工作液制备l 将6ml Oil red-O 染色工作液与4ml 蒸馏水混合。l 混合均匀,室温下静置10-20 分钟。l 用0.2 或 0.45 μm PTFE 滤膜(如:Minisart SRP 17575)过滤。l 2-3 小时内使用。 Oil red-O 染色过程l 吸除培养基,用DPBS洗一次(1ml/well)l 固定:吸除DPBS,每孔加入1ml 10% 福尔马林(4% 甲醛)。室温固定30-60分钟。l 吸除福尔马林,用1ml 60%的异丙醇洗涤2-3分钟。l 吸除异丙醇,每孔加入1ml Oil red-O 染色工作液。l 室温静置10-30分钟。l 用1ml 蒸馏水洗涤,去除多余的染料。l 置于显微镜下观察成脂染色效果及图像采集。 半定量Oil red-O 染色 (可选)l 每孔用0.5ml 100%异丙醇洗涤染料。l 室温下静置1小时。l 确定所有Oil red-O溶解在溶液中。l 500nm 测OD值(100% 异丙醇作为空白对照)。产品官网链接:https://www.bioind.com/worldwide/adipogenic-differentiation-media/
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