MSCgo™间充质干细胞成脂诱导分化试剂 05-330-1

货号：05-330/05-331/05-332

规格：100ml

产品名称：MSCgo™间充质干细胞成脂诱导分化试剂

产品描述
MSCgo™间质干细胞成脂诱导分化培养基试剂盒，不含血清，无异源，适用于不同来源的MSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织；hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT
 
成脂结果
倒置显微镜观测到脂滴累积形成球形细胞，表明hMSC分化成脂。使用不同的hMSC（细胞类型、年龄、代数）得到的分化细胞数量也不一样。
 
试剂盒组成
MSCgo™间质干细胞成脂诱导分化培养基试剂盒

 
试剂配制
1       室温下解冻2个Supplement Mix。
2       将0.1ml Supplement Mix I与 1.5ml Supplement Mix II 加入到100ml Adipogenic Basal Medium 中，于2-8°C储存。
3       完全培养基可在2-8°C储存一个月。
 
所需材料
BI： 05-330-1 ，05-331-1，05-332-1
• MSC NutriStem® XF : BI；05-200-1，05-201-1
• MSC Attachment solution XF : BI；05-752-1
• 可选： Oil Red O，Sigma；O0625
 
成脂诱导分化操作
接种hMSC
1       用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接种6x10⁴ 细胞 (3x10⁴ cells/cm²)。注意：若使用其他培养器皿，请适当调整体积。
2       置于37°C，5% CO₂ 培养箱中培养。
 
分化
1       培养24h后即细胞融合度达到80-90%时，将MSC NutriStem® XF 培养基吸除，每孔加入0.5ml分化培养基。
注意：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。
2       置于37°C，5% CO₂ 培养箱中培养14-21天，参照以下建议的替代培养基。
 
根据hMSC类型的替代培养基方法
不同来源的hMSC具有不同的多向分化潜能。例如，hMSC-AT需要较短的诱导期(~ 6天)，而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天诱导期。
注意：
l  对于所有不同类型的hMSC，诱导成脂后建议使用维持培养基。
l  避免将液体直接加入到脂肪细胞上，需要非常小心移液，因为脂肪细胞是脆弱的。
 
hMSC-AT:
一个分化周期/维持培养基
l  6-8天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液。
l  成脂诱导完成后，用维持培养基(MSC NutriStem® XF(05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培养基，培养3-4天。
 
hMSC-BM:
一个分化周期/维持培养基
l  8-12天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。
l  成脂诱导完成后，用维持培养基(MSC NutriStem® XF (05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培养基，培养3-4天。
 
hMSC-CT:
至少两个分化周期/维持培养基
l  5-10天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。
l  成脂诱导完成后，用维持培养基(MSC NutriStem® XF (05-200-1，05-201-1)替代分化培养基，培养3-6天，每2-4天换液。
l  重复培养周期直到观测到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成）。



Oil red-O 染色分析 （可选）
Oil red-O 用于染色脂滴。
 
Oil red-O 染色储存液制备
l  将0.35g Oil Red-O (Sigma；O0625) 溶解到100ml 99%异丙醇中。
l  用0.2 或 0.45 μm PTFE 滤膜(如：Minisart SRP 17575)过滤。
l  溶液置于2-8°C储存一年。
 
Oil red-O 染色工作液制备
l  将6ml Oil red-O 染色工作液与4ml 蒸馏水混合。
l  混合均匀，室温下静置10-20 分钟。
l  用0.2 或 0.45 μm PTFE 滤膜(如：Minisart SRP 17575)过滤。
l  2-3 小时内使用。
 
Oil red-O 染色过程
l  吸除培养基，用DPBS洗一次（1ml/well）
l  固定：吸除DPBS，每孔加入1ml 10% 福尔马林（4% 甲醛）。室温固定30-60分钟。
l  吸除福尔马林，用1ml 60%的异丙醇洗涤2-3分钟。
l  吸除异丙醇，每孔加入1ml Oil red-O 染色工作液。
l  室温静置10-30分钟。
l  用1ml 蒸馏水洗涤，去除多余的染料。
l  置于显微镜下观察成脂染色效果及图像采集。
 
半定量Oil red-O 染色 （可选）
l  每孔用0.5ml 100%异丙醇洗涤染料。
l  室温下静置1小时。
l  确定所有Oil red-O溶解在溶液中。
l  500nm 测OD值（100% 异丙醇作为空白对照）。




产品官网链接：https://www.bioind.com/worldwide/adipogenic-differentiation-media/