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MSCgo™间充质干细胞成骨/
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2-8度
05-442-1B
货号:05-440/05-442
规格:100ml
产品名称:MSCgo™间充质干细胞成骨/快速成骨诱导分化试剂
产品描述
MSCgo™ Osteogenic间质干细胞成骨诱导分化培养基,不含血清,无异源,即用型完全培养基,诱导hMSC分化成成熟成骨细胞。适用于不同来源的MSC,如骨髓、成骨组织和脐带组织;hMSC-BM,hMSC-AT,hMSC-CT。
成骨结果钙结节、钙分泌与矿化形成,表明hMSC分化成骨。可以用茜素红S(ARS)染色检测。使用不同的hMSC(细胞类型、年龄、代数)形成钙结节与钙分泌的数量也不一样。 所需材料• MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium BI; 05-440-1MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium BI; 05-442-1• MSC NutriStem® XF Medium: BI; 05-200-1 and 05-201-1• MSC Attachment solution : BI; 05-752-1• 可选: Alizarin Red S (ARS), Sigma; A-5533,建议选择Vivacell品牌,间充质干细胞成骨分化染色试剂盒,货号: C37C00150。 成骨诱导分化操作1 接种hMSC:用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘,每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF,接种6x104 细胞 (3x104 cells/cm2)。注意:若使用其他培养器皿,请适当调整体积。2 置于37°C,5% CO2 培养箱中培养。3 分化:培养24h后即细胞融合度达到80%时,将MSC NutriStem® XF 培养基吸除,每孔加入0.5ml分化培养基。注意:若细胞融合度<80%,继续再培养一天。4 置于37°C,5% CO2 培养箱中培养10-21天,每2-3天换液。注意:培养时间越长,越容易矿化,ARS染色更明显。5 成骨评价:使用2%的ARS染色液。 ARS 染色分析 (可选)制备2% ARS染色液注意:染色液需新鲜制备,或调节pH 4.1-4.3l 将2g ARS (Sigma;A-5533) 溶解到100ml 蒸馏水中。l 用0.1N HCl 或 0.5% v/v NH3调节pH 4.1-4.3。l 混合均匀,用0.45 μm CA 注射器(如:Minisart 16555)过滤。l 溶液置于2-8°C储存一年。l 使用前测pH值,如有必要用0.1N HCl 或 0.5% v/v NH3调节pH 4.1-4.3。 ARS 染色过程l 吸除培养基,用DPBS (BI; 02-023-1)洗一次(1ml/well)l 固定:吸除DPBS,每孔加入1ml 70% ETOH。l 室温固定30-60分钟。l 吸除ETOH,用蒸馏水洗涤3次(1ml/well)。l 吸除蒸馏水,每孔加入1ml 2% ARS 染色工作液。l 室温静置30-60分钟。l 吸除染色液,用1ml 蒸馏水洗涤4次(1ml/well)。注意:细胞分泌的钙会洗脱掉,钙化结节会被染色。l 每孔加入1ml 蒸馏水避免细胞干燥。l 观察成骨染色效果、图像采集及进行成骨评价。注意:成骨细胞含钙会被ARS染成橘红色。 半定量ARS 染色 (可选)l 每孔用0.5ml 10% (w/v in DDW) CPC洗涤ARS染料。l 室温下静置1小时。l 550nm 测OD值(10% CPC作为空白对照)。(150μl/well; 96w/p)产品官网链接:https://www.bioind.com/worldwide/mscgo-osteogenic-differentiation-medium/
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