MSCgo™间充质干细胞成骨/快速成骨诱导分化试剂 05-

货号：05-440/05-442

规格：100ml

产品名称：MSCgo™间充质干细胞成骨/快速成骨诱导分化试剂
 

产品描述

MSCgo™ Osteogenic间质干细胞成骨诱导分化培养基，不含血清，无异源，即用型完全培养基，诱导hMSC分化成成熟成骨细胞。适用于不同来源的MSC，如骨髓、成骨组织和脐带组织；hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT。

 
成骨结果
钙结节、钙分泌与矿化形成，表明hMSC分化成骨。可以用茜素红S(ARS)染色检测。使用不同的hMSC（细胞类型、年龄、代数）形成钙结节与钙分泌的数量也不一样。
 
所需材料
• MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium  BI; 05-440-1
MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium  BI; 05-442-1
• MSC NutriStem^® XF Medium: BI; 05-200-1 and 05-201-1
• MSC Attachment solution : BI; 05-752-1
• 可选： Alizarin Red S (ARS), Sigma; A-5533，建议选择Vivacell品牌，间充质干细胞成骨分化染色试剂盒，货号： C37C00150。
 
成骨诱导分化操作
1       接种hMSC：用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接种6x10⁴ 细胞 (3x10⁴ cells/cm²)。
注意：若使用其他培养器皿，请适当调整体积。
2       置于37°C，5% CO₂ 培养箱中培养。
3       分化：培养24h后即细胞融合度达到80%时，将MSC NutriStem® XF 培养基吸除，每孔加入0.5ml分化培养基。
注意：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。
4       置于37°C，5% CO₂ 培养箱中培养10-21天，每2-3天换液。
注意：培养时间越长，越容易矿化，ARS染色更明显。
5       成骨评价：使用2%的ARS染色液。
 
ARS 染色分析 （可选）
制备2% ARS染色液
注意：染色液需新鲜制备，或调节pH 4.1-4.3
l  将2g ARS (Sigma；A-5533) 溶解到100ml 蒸馏水中。
l  用0.1N HCl 或 0.5% v/v NH₃调节pH 4.1-4.3。
l  混合均匀，用0.45 μm CA 注射器(如：Minisart 16555)过滤。
l  溶液置于2-8°C储存一年。
l  使用前测pH值，如有必要用0.1N HCl 或 0.5% v/v NH₃调节pH 4.1-4.3。
 
ARS 染色过程
l  吸除培养基，用DPBS (BI; 02-023-1)洗一次（1ml/well）
l  固定：吸除DPBS，每孔加入1ml 70% ETOH。
l  室温固定30-60分钟。
l  吸除ETOH，用蒸馏水洗涤3次（1ml/well）。
l  吸除蒸馏水，每孔加入1ml 2% ARS 染色工作液。
l  室温静置30-60分钟。
l  吸除染色液，用1ml 蒸馏水洗涤4次（1ml/well）。
注意：细胞分泌的钙会洗脱掉，钙化结节会被染色。
l  每孔加入1ml 蒸馏水避免细胞干燥。
l  观察成骨染色效果、图像采集及进行成骨评价。
注意：成骨细胞含钙会被ARS染成橘红色。
 
半定量ARS 染色 （可选）
l  每孔用0.5ml 10% (w/v in DDW) CPC洗涤ARS染料。
l  室温下静置1小时。
l  550nm 测OD值（10% CPC作为空白对照）。(150μl/well; 96w/p)


产品官网链接：https://www.bioind.com/worldwide/mscgo-osteogenic-differentiation-medium/