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- 2025年07月16日
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100mL/瓶
干细胞温和消化酶
【干细胞温和消化酶 用途与描述】
专门用于干细胞的消化，包括脐带间充质干细胞，脂肪间充质干细胞，胚胎干细胞（ES）等。
消化作用极其温和，对细胞的损害小。为目前干细胞临床研究与临床应用领域产品。
本产品特别适用于大规模生产干细胞的企业。消除了导致干细胞培养失败的最大隐患——消化过度问题。
本产品也特别适用于干细胞药物的研究与开发企业。无任何动物来源组分，成分明确，极大降低了干细胞药物申报的验证工作量与申报难度。
【干细胞温和消化酶 规格与保存】
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产品名称 |
产品货号 |
规格与保存 |
| 干细胞温和消化酶 | NC1004 |
100mL/瓶，2-8℃保存，效期12个月 |
【干细胞温和消化酶 产品特点】
1. 产品容错性极好。
即便消化时间长达15分钟，对干细胞的后续传代也几乎没有影响。减少了对操作人员技能的要求。
2. 即取即用，不需等待。
4℃可稳定保存一年，不再需要-20℃保存。
3. 纯人工合成，无任何动物来源组分。
无感染疯牛病毒（天然牛胰酶）或口蹄疫病毒（天然猪胰酶）的可能性。成分明确，无任何未知的后果。
【干细胞温和消化酶 产品性能】
新一代消化产品（温和消化酶）与传统消化产品（猪牛天然胰酶）全面对比表
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项目类型 |
细分类别 |
传统产品 |
新一代产品 | |
| 消化性能 |
正常消化 |
细胞活率 | 85% | 95%以上 |
| 消化后继续培养得到的细胞数 | 1.06x106 | 1.14x106 | ||
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超时消化 | 细胞活率 | 60% | 95%以上 | |
| 消化后继续培养得到的细胞数 | 0.64x106 | 1.08x106 | ||
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极端消化 | 细胞活率 | 0-10% | 90%以上 | |
| 消化后继续培养得到的细胞数 | 无法收货细胞 | 1.04x106 | ||
| 使用便利程度 |
消化后是否需要终止？ | 需要 | 不需要 | |
|
是否需要-20℃保存？ | 需要 | 不需要 | ||
|
是否可以即取即用？ | 不可以 | 可以 | ||
| 使用综合成本 | 终止消化的成本 |
高。 |
极低。 | |
| 细胞应用前病毒检测的成本 |
高。 |
0成本。 | ||
| 产品安全性 |
是否无动物来源组分？ | 不是 | 是 | |
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是否可以确知无动物病毒？ | 不可以 | 可以 | ||
| 细胞药物申报难度 |
产品的残留影响的证明难度 |
极大。 |
小。 | |
上述数据为接种脐带来源的MSC的P2代种子细胞，T25培养瓶，接种密度8000 cells/cm2，72小时后消化所得P3代细胞的对应数据。
正常消化（未消化过度）时，温和酶确定好于传统胰酶。
P2代MSC种子细胞，传代培养72小时后，分别用温和酶和传统胰酶消化，得到P3代MSC细胞，检测消化后的细胞活率。
P3代MSC细胞继续培养72小时，分别用温和酶和传统胰酶消化，收获P4代MSC细胞，细胞计数。
细胞数量方面相差不大：温和酶比传统胰酶多出 7%。
细胞活率方面相差较大：温和酶比传统胰酶高出10%。
| 对比类别 | 传统胰酶 | 温和消化酶 |
| P3代MSC细胞活率 | 85% | 95% |
| 收到的P4代MSC细胞数量 | 1.06x106cells | 1.14x106cells |
复苏P2代MSC种子细胞，连续传代3次，分别用温和酶和传统胰酶消化。
细胞数量方面：每一代温和酶均比传统胰酶多出 5%-10%。
4℃可稳定保存一年，不再需要-20℃保存。
干细胞温和消化酶在4℃环境下保存14个月，在超过有效期两个月后，酶活性仍保持在96%。
操作更便利，消化后不需终止消化，PBS稀释即可。
传统胰酶消化细胞后，需要额外添加血清，或完全培养基，或胰酶抑制剂，结合胰酶的消化位点，以达到终止消化的目的。
温和消化酶由于其设计原理，在消化细胞后，不需要终止消化，只需要添加PBS，稀释消化酶，离心去除即可。极大便利了操作。
成分明确，无任何动物来源组分，更安全。更适合临床研究、临床应用或药物申报用途。
传统胰酶，取自牛或猪羊的胰脏，经后期纯化结晶而得。动物来源与提取工艺决定了传统胰酶难以避免感染动物病毒，如疯牛病毒，猪口蹄疫病毒等。因此难以应用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。
温和消化酶，为全人工合成酶，消化位点清晰，经原核或真核系统表达，生产过程无任何动物来源组分的引入，所以安全性极高，尤其适用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。
超时消化（消化过度）时，温和酶可多收细胞 68%。
分别超时2min消化MSC细胞，后传代培养72小时，收获细胞进行计数：
温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 68%。且细胞镜下形态良好。
而经传统胰酶消化的细胞，培养后镜下细胞形态杂乱。
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传统胰酶延长消化2分钟，MSC的细胞照片
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传统胰酶消化后，传代72h 后的细胞照片
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温和酶延长消化2分钟，MSC的细胞照片
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温和酶消化后，传代72h 后的细胞照片
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极端消化（消化15分钟）时，温和酶基本不受影响。传统胰酶完全失败。
分别 15min消化MSC细胞，后传代培养72小时，收获细胞进行计数：
温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 11倍。且细胞镜下形态良好。
而经传统胰酶消化的细胞，培养后镜下细胞形态杂乱。
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传统胰酶延长消化15分钟，MSC的细胞照片
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传统胰酶消化后，传代72h 后的细胞照片
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温和酶延长消化15分钟，MSC的细胞照片
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温和酶消化后，传代72h 后的细胞照片
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【干细胞温和消化酶 使用方法】
一、细胞消化前准备（以T25瓶为例）
1、观察贴壁细胞长满整个培养瓶视野80%以上，弃去细胞培养液。
2、用5mL无钙镁的HBSS溶液或PBS清洗贴壁细胞，弃去清洗液。
二、细胞消化过程（以T25瓶为例）
1、向T25瓶中加入1mL干细胞温和消化酶，置于室温环境中消化细胞。
2、约2min后，细胞变圆，立即加入5mL PBS溶液进行稀释。
3、将上述6mL含细胞液体转移至离心管中，置于离心机中离心，1000rpm，5min。
4、去除离心管中的上清液。
5、根据接下来的应用目的在离心管中加入干细胞培养基（细胞传代用途）或细胞冻存液（细胞冻存 用途）。
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文献和实验操作如下： ⑴配制所需试剂 SSC溶液(20×)：3mol/L NaCl，0.3mol/L柠檬酸钠。 Denhardt’s溶液(50×)：聚蔗糖5g，聚乙烯吡咯烷酮5g，牛血清白蛋白(BSA)5g加水至500ml。 预杂交液：6×SSC，5×Denhardt’s溶液，0.5％SDS，100?g/ml经变性或断裂成片段的鲑精DNA。 ⑵将含靶核酸的NC膜漂浮于6×SSC液面，使其由下至上完全湿润，并继续浸泡2分钟。 ⑶将湿润NC膜装入塑料袋中，按0.2ml/cm2的量
，然后将 NC 膜夹在两层滤纸间，保存于干燥处。五、探针标记进行 Southern 杂交的探针一般用放射性物质标记或用地高辛标记。放射性标记灵敏度高，效果好；地高辛标记没有半衰期，安全性好。这里介绍放射性标记。探针的标记方法有随机引物法、切口平移法和末端标记法，有一些试剂盒可供选择，操作也很简单。以下为 Promega 公司随机引物试剂盒提供的标记步骤：1. 取 25~50 ng 模板 DNA 于 0.5 mL 离心管中，100 ℃ 变性 5 min，立即置冰浴。2. 在另一个 0.5 mL 离心管中
后，冷至室温，NaOH调pH至7.5，加入10ml以下缓冲液（1M Tris-HCl pH7.5，MgCl2 0.19%，NaCL 5.8%，Triton X-100 0.05ml）定容至100ml 50×Denhardt's 溶液 1％PVP 1M PBS NaCl 0.8% pH 7.4 1%BSA KCl 0.02%
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