高通量96孔板血液基因组提取试剂盒北京厂家

特别提示：包括高通量96孔板血液基因组提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高通量96孔板血液基因组提取试剂盒
英文名称：96wells Blood Genomic DNA Extraction Kit
产品货号：WH0154
产品规格：4×96孔

本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，操作简单、快速，在短时间内即可完成96个不同血液样品DNA的提取。提取的基因组DNA可供基因检测或者组织分型、PCR、酶切和Southern杂交等实验操作。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。200μl-600μl全血样本可以提取4～20μg的DNA。

产品特点：
·快速分离高质量的血液基因组。
·不需酚/lǜ仿有毒有机试剂。
·完全去除污染物和抑制剂，便于下游应用。
·可用于高通量自动化核酸提取工作站。

提取实例：

使用本试剂盒提取600μl血液基因组DNA实验结果，琼脂糖凝胶浓度为1%，6V/cm，电泳20min。

实验流程：

 

组分	规格
细胞裂解液CL	4×250ml
缓冲液GB	2×50ml
缓冲液GD	2×52ml
漂洗液PW	3×50ml
洗脱缓冲液TB	60ml
Proteinase K	8×1ml
半裙边96孔吸附板CB	34个
96孔深孔板	12个
封口膜	36张

储存条件：室温（15–25℃）干燥条件下可保存1年；更长时间的保存可置于2–8℃。2–8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．使用前请按照瓶上标签在缓冲液GD和漂洗液PW中加入相应体积的无水乙醇。
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3．若缓冲液GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
4．所有的离心步骤均为室温下进行。
5．洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。
6．洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用去ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0–8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
7．使用排枪时应注意不要打湿96孔板孔口。离心时，封口膜务必封盖严实，以防离心过程中有液体溅出产生交叉污染。

操作步骤：（以200μl血液样本为例）
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．在96孔深孔板中加入20 μl Proteinase K。
2．每孔加入200 μl血液样品，并对每个样品做相应的标记。
3．加入200 μl缓冲液GB，枪头抽打20次，加盖新的封口膜，56℃放置30min，且每10 min取出轻柔晃动。
  注意：不要剧烈晃动，防止液体溅出产生交叉污染。当样本数目比较大时,可以按每200 μlGB加入20 μl Proteinase K的比例预先混合，混合后每个样本用量为220 μl。
4．揭去封口膜，加入200 μl无水乙醇，枪头抽打20次混匀。
5．将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个96孔吸附板CB3中（吸附板放入新的96孔深孔板中），加盖新的封口膜3,600rpm（~2,130×g)离心10 min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。
6．向96孔吸附板CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），加盖新的封口膜3,600rpm（~2,130×g)离心10 min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。
7．向96孔吸附板CB3中加入500 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），加盖新的封口膜3,600rpm（~2,130×g)离心10 min，倒掉废液，将吸附板重新放在深孔板上。
8．向96孔吸附板CB3中加入500 μl漂洗液PW，加盖新的封口膜3,600rpm（~2,130×g)离心15min，倒掉废液，将吸附板重新放在深孔板上。
9．3,600rpm（~2,130×g)离心10 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10．将96孔吸附板CB3转入一个新的96孔深孔板中，向吸附膜的中间部位悬空滴加80 μl洗脱缓冲液TB，室温放置5-10 min，加盖新的封口膜3,600rpm（~2,130×g)离心10 min收集DNA,用新的封口膜封口后用于下游实验或者-20℃保存。
  注意：洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解


操作步骤：（以600μl血液样本为例）
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．处理材料：
  将600 μl的血液样品加到96孔深孔板中，并对每个样品做相应的标记。向每孔样品中加入2倍样品体积的细胞裂解液CL（深孔板zuì多容量为2.2ml），枪头抽打20次混匀，加盖封口膜，3,600rpm（~2,130×g)离心10 min，揭去封口膜，抽弃上清；
2．再次加入2倍样品体积的细胞裂解液CL，枪头抽打10-20次混匀，加盖新的封口膜，3,600rpm（~2,130×g)离心10 min，抽弃上清至剩余约200μl残留溶液。
3．加入20μl Proteinase K和200μl缓冲液GB，枪头抽打20次，加盖新的封口膜，56℃放置30min，且每10 min取出轻柔晃动。
  注意：当样本数目比较大时，可以按每200μl GB加入20 μl Proteinase K的比例预先混合，混合后每个样本用量为220μl。
4．此后操作接200 μl血液处理流程4。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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