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20 reactions
描述
Gateway® BP Clonase® II 酶混合物催化来自克隆的 PCR 产物或者亚克隆 DNA 片段(含有 attB 位点)与供体载体(含有 attP 位点)进行体外重组,产生入门克隆。 Gateway® BP Clonase® II 是包含酶和缓冲剂的单一型混合物,所需的移液步骤更少,因此可以快捷地设置十微升反应体系。规格
| Enzyme: | BP Clonase |
|---|---|
| Product Line: | Clonase®, Gateway® |
| Product Size: | 20 reactions |
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文献和实验)以及Gateway BP Clonase酶混合物。接着转化进大肠杆菌中,您将会获得包含目的基因的入门克隆,同时目的基因两侧具有attL重组位点。这个入门克隆可以与任何Gateway目的载体进行重组(参看图2)。 3、Gateway改造过的cDNA文库 如果您已经有了用Gateway兼容载体构建的cDNA文库,您就可以通过pDONR载体和BP Clonase酶混合物进行一个简单的重组反应,很容易地把单个克隆转换成Gateway入门克隆。这样就不再需要亚克隆和测序,为您节约数小时的时间
入门载体提供了Kozak 序列。此外,pENTR11提供了SD (Shine-Dalgarno)序列,便于在大肠杆菌中有效的翻译。 2、PCR重组克隆 重组是从PCR产物创建Gateway入门克隆的另一种方法。这种方法是通过合并attB位点到上游和下游引物上,然后共同孵育PCR扩增产物和pDONR载体(包含attP位点)以及Gateway BP Clonase酶混合物。接着转化进大肠杆菌中,您将会获得包含目的基因的入门克隆,同时目的基因两侧具有attL重组位点。这个入门克隆
cDNA synthesis using superscript II
: 1. 70 °C 10 min 2. 25 °C 10 min 3. 4 °C store Prepare the enzyme mix
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