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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
66
- 英文名:
In Situ Cell Apoptosis Detection Kit,FITC
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
冷冻(-20℃)
- 规格:
20次|100次
特别提示:包括TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(FITC)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(FITC)
英文名称:In Situ Cell Apoptosis Detection Kit,FITC
产品货号:GS0248
产品规格:20次|100次
储存条件:冷冻(-20℃)
概述
Apoptosis is essential in many physiological processes.Several methods have been described to identify apoptotic cells.Endonucleolysis is considered as the key biochemical event of apoptosis,resulting in double-stranded,low molecular weight DNA fragments as well as single strand breaks in high molecular weight DNA.Those DNA strand breaks can be identified by labeling free 3’-OH termini with modified nucleotides in an enzymatic reaction.Terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)can catalyze DIG-dUTP to free 3’-OH DNA ends.The DIG-dUTP is first react with biotin-conjugated anti-digoxin antibody,which subsequently associate with streptavidin-FITC(SABC-FITC).FITC is excited at around 490-495nmand emitted visible yellow-green light at 520-530 nm.
组份
Component A:Labeling Buffer;Component B:TdT(20X);Component C:DIG-dUTP(20X);Component D:Blocking Reagent;Component E:Biotin-conjugated anti-digoxin antibody;Component F:SABC-FITC(100X);Component G:Protein K(200X);Component H:Antibody Dilution Solution;Positive control samples
我公司销售的TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(FITC),质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型,绿色荧光)为例) TUNEL检测:使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min,再使用二甲苯脱蜡2次,每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗,便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡,其中 TUNEL 法做的最多,我购买的试剂盒主要是 roche、 promega 公司,结果大多数成功,偶尔也有失败,下面我把实验中的关键问题与大家共享一下,同时也希望能对初学者有所帮忙。 TUNEL 法的实验原理 基本原理:对不同组织切片先增加细胞膜通透性,然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内,在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合,再用 HRP 标记的链霉
c,用-20度预冷的丙酮冷冻固定10分钟 d,PBS清洗 10minX2 e,用新鲜配制的通透液(含0.1%的Triton X-100和0.1%的柠檬酸钠溶液) 室温通透15min。 f,PBS清洗 10minX2 g. 阳性对照组加入DNase I 40ul(1u/ul),37度孵育15min h. PBS清洗 10minX2 i. Roehe试剂盒中的的TUNEL反应缓冲液(含FITC标记的dUTP)和脱氧核糖 核酸末端
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