DNA片段化试剂北京品牌

特别提示：包括DNA片段化试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DNA片段化试剂
英文名称：DNA Fragmentation Reagent
产品货号：WH0207
产品规格：24次|96次

本制品为高通量测序平台文库构建配套试剂盒，用于文库构建前的大片段DNA片段化。模块利用时间依赖型酶促反应的原理，根据不同的作用时间将双链DNA随机切割成200~500 bp的片段，所得片段为平末端双链DNA片段，5"端基团含有5"-P，3"端基团含有3"-OH，可直接进行后续的dA或adapter添加。通过本制品对双链DNA随机的切割，表明本产品不具碱基偏好性，且不同类型切割DNA片段的测序覆盖率与机械切割一致。

适用范围：为构建NGS文库制备片段化的双链DNA。
适用样本量：1ng~1μg DNA

产品特点：
·无需特殊仪器设备，通过酶促反应简便快速的片段化双链DNA。
·使用灵活，通过调整片段化时间，灵活调整DNA片段化长度。
·反应高效，单个反应体系即可完成1ng～1μg DNA样本的片段化。

产品组成：

组分	24次	96次
5×Frag Enzyme Mix	240μl	960μl
10×Frag Buffer	120μl	480μl
Nuclease-Free ddH2O	1ml	4×1ml

保存条件：-25~-15℃保存，避免反复冻融，保质期为一年。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）
1．操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
2．请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。
3．试验开始前，请清洁操作台，确保没有RNA酶和DNA的污染。
4．进行文库扩增前，请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。
5．试验前请仔细阅读说明书，如果需要暂停试验，或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20℃并安排后续试验。

推荐使用的其他试剂：
1.DNA末端修复/加dA尾试剂（WH0209-01/02)
2.adapter快速连接试剂（WH0201-01/02）
3.NGS文库富集试剂（WH0210-01/02)

操作步骤：

一、试验准备
1.在开始实验前，明确核酸的浓度及纯度至关重要，推荐DNA上样量为1ng~1μg。DNA需溶解于以下溶液中：去离子水、10mM Tris、Buffer EB或LoTE（0.1×TE）等。
注意：
?确定上样DNA浓度至关重要，尤其在上样量低于100 ng时。推荐使用Qubit、Picogreen或者其他染料法对DNA浓度进行准确定量。
?请确认DNA溶液中不含阳离子及螯合剂。如果DNA溶解于1×TE或不确定DNA溶液中的EDTA浓度，使用Agencourt AMPure XP磁珠进行纯化。
2.将各试剂置于冰上，5×Frag Enzyme Mix融化后用手指后轻弹混匀，不要涡旋。其余试剂可短暂涡旋混匀。

二、试验步骤
1.照下表设置PCR仪反应程序。开启热盖，热盖温度设置为70度。

操作步骤	温度	时间
1	4℃	1min
2	32℃	3-22min*
3	65℃	30min
4	4℃	保持

*注：确切的片段化反应时间需要根据DNA的实际上样量进行优化。下表1中列出100ng DNA片段化所需的时间。用户可以依据此时间进行调整。调整过程中，我们推荐额外设置一个反应时间延长3min以及一个缩短3min的对照，这样有助于确定切割至所需片段大小时所需要的准确反应时间。

表1：片段化时间选择表

	片段化时间（min)（32℃)
DNA主峰大小	200bp	300bp	400bp	500bp
100ngDNA上样量	15	8	5	3.5

图1.100ng大肠杆菌基因组DNA片段化图谱（3～22 min）

2．在薄壁管中按下表配制反应体系，冰上操作，各组分加入后，请轻柔吸打混匀，注意不要涡旋。

成分	用量（μl)
10×Frag Buffer	5
DNA样本	X
Nuclease-Free ddH2O	（35-X)*
总体积	40

  *注：对于多个反应，请计算所需试剂的总体系并在此基础上增加体系10%，以避免因溶液转移过程中挂壁损失而造成分装反应数不足的问题。
3．向薄壁管中加入10μl 5×Frag Enzyme Mix，轻柔吹打6～8次，不要涡旋。
  注：此过程需一直处于冰浴中进行。
4．将薄壁管短暂离心，收集溶液至管底后，立即转移至4℃预冷的PCR仪中，启动步骤1中的反应程序。
5．当反应程序结束，PCR仪温度降至4℃后，将薄壁管从PCR仪中取出并置冰上。立即进行下一步实验操作。

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