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北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格

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  • ¥140 - 2150
  • 百奥莱博
  • 北京
  • WE0229-DMN
  • 2025年07月15日
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    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20℃

    • 保质期

      长期

    • 英文名

      NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina

    • 库存

      311

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。


    名称:北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格
    编号:WE0229
    规格:24次|96次
    品牌:百奥莱博
    产地:国产|进口
    英文名:NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina
      本试剂盒提供了DNA文库构建所需要的酶预混体系及反应缓冲液,包含除接头与PCR引物外的所有成分,用于illumina二代测序平台DNA文库构建。和一般建库方法相比,该试剂盒操作简单、方便,极大地缩短了文库构建时间。另外,试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集,无偏好的PCR扩增,扩大了序列的覆盖区域,可高效制备用于illumina二代测序平台的DNA文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性。

    试剂盒组成

     
    组份 24次 96次
    End Prep Enzyme Mix 48μl 192μl
    10x End Repair Reaction Buffer 200μl 800μl
    T4 DNA ligase 48μl 192μl
    T4 DNA ligase Buffer 400μl 2×800μl
    HiFidelity 2×PCRMasterMix 600μl 2×1.2ml


    试剂盒特点;
    1、末端补平,磷酸化,加A一步完成。
    2、不需纯化,直接加接头。
    3、超保真扩增,最大程度上降低了扩增偏好性。
    4、支持多种样本,且所得文库能够用于Illumina GAIIx,HiSacnSQ、HiSeq 2500/2000/1000和MiSeq sequencing等测序平台的测序。

    自备仪器、试剂和耗材
    1、磁力架:建议使用DynaMagTM-2(货号: 12321D)。
    2、DNA纯化回收试剂盒:建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(货号: WE0205)。
    3、样本接头引物试剂盒:建议使用百奥莱博二代测序多样本接头引物试剂盒 I/II(货号:WE0241/WE0240)。
    4、无水乙醇,EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0),去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
    5、反应管:建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管;枪头:建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、避免试剂的反复冻融,建议您首次使用试剂盒后将剩余试剂分装保存。
    2、PCR产物因操作不当极易产生污染,导致实验结果不准确,建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离,并使用专门的移液器,定时对各实验区域进行清洁。

    DNA建库流程示意图:



    操作步骤

    样本要求: 5ng-1μg打断的双链DNA,溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中。DNA纯度要求:OD260/OD280=1.8~2.0。

    DNA末端修复反应:
    1、向200μl PCR管中加入以下试剂:
    试剂 体积
    10×End Repair Reaction Buffer 6.5μl
    End Prep Enzyme Mix 2μl
    fragmented DNA X(5ng-1μg)
    RNase-free Water Up to 65μl


    2、用枪头将上述溶液轻轻吹吸混匀,短暂离心,使所有组分收集到管底。
    3、将上述PCR管置于PCR仪中,热盖打开, 反应程序如下:
    15 min @ 12℃
    15 min @ 37℃
    20 min @ 72℃

    Adaptor 连接:
    建议使用百奥莱博adaptor进行连接,也可选择使用NEB、illumina公司的adaptor,具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤
    1、向上述已完成DNA末端修复的反应液中直接加入以下试剂:
    试剂 体积
    T4 DNA ligase buffer for illumina 14μl
    T4 DNA ligase 2μl
    Adaptor 2.5μl

    此时管中溶液总体积为83.5μl。
    注意:若起始样本量少于100ng,请将adaptor用去离子水稀释10倍至1.5μM后使用。
    2、用枪头将上述试剂吹吸混匀,短暂离心,使溶液收集到管底。
    3、20℃温浴15分钟。
    注意:若此操作使用pcr仪,请将热盖关闭。

    DNA片段的选择性回收:
      建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。
    注意:DNA片段选择性回收是可选步骤,若起始样本量低于50ng,不建议进行DNA片段选择性回收,直接进行DNA片段的纯化。另外构建不同大小的DNA文库时,DNA片段选择性回收的磁珠使用量不同,具体磁珠用量可参照附表1(若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠,需自行摸索最佳磁珠用量)。
      以下操作步骤中,可选择回收DNA片段长度峰值为320bp(插入片段长度200bp),反应起始体积为100μl。
    1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
    2、向连接反应液中加入16.5μl去离子水,使adaptor连接反应缓冲液体积至100μl。
    注意:若使用NEB adaptor,只需要加入13.5μl去离子水。
    3、将上述adaptor反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中。
    4、加入70μl混合均匀的MCPure,涡旋震荡5秒钟后, 室温静置5分钟。
    5、短暂离心,将离心管置于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠。
    注意:不要弃除上清。
    6、向上清中加入25μl混合均匀的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟。
    7、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心吸取上清并弃除,期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
    注意:不要弃除磁珠。
    8、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
    9、重复步骤8。
    10、保持离心管固定于磁力架上,室温静置10分钟,使磁珠在空气中干燥。
    11、将离心管从磁力架上取下,加入28μl 10 mM Tris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备),涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟。
    12、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将23μl洗脱液转移至一个新的PCR管中;
    注意:一定不要转移磁珠,微量磁珠污染可影响后续PCR反应的正常进行。

    另一种方案: DNA片段的纯化:
    1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
    2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
    3、加入1倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒钟后,室温静置5分钟。
    4、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心吸取上清并弃除,期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
    注意:不要弃除磁珠。
    5、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
    6、重复步骤5。
    7、保持离心管固定于磁力架上,室温静置10分钟,使磁珠在空气中干燥。
    8、将离心管从磁力架上取下,加入28μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟。
    9、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将23μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。

    附表1:不同片段选择回收时磁珠建议用量
    DNA文库大小 插入片段 150bp 200bp 250bp 300-400bp 400-500bp 500-700bp
    插入片段+adaptor 270bp 320bp 400bp 400-500bp 500-600bp 600-800bp
    磁珠用量 第一次选择 85 70 55 50 45 35
    第二次选择 25 25 20 20 20 15


    PCR扩增:
    1.在PCR管中加入以下试剂并混匀。
    试剂 体积
    连接adaptor后的DNA片段 23μl
    2×HiFid elity PCR Mix 25μl
    Univesial primer 1μl
    Index primer 1μl
    总体积 50μl


    2、PCR反应条件:
    步骤 温度 时间 循环数
    预变性 98℃ 30 s  
    变性 98℃ 10 s 6-16个循环
    退火 65℃ 30 s
    延伸 72℃ 30 s
    终延伸 72℃ 5 min  

    注意:建议1μg样本起始量时PCR循环数为6个循环,50ng时10个循环,5ng时14-15个循环,PCR循环数也可根据实验需要进行优化。

    PCR产物的纯化:
    1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
    2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
    3、加入1倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟。
    4、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟)。小心吸取上清并弃除,期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
    注意:不要弃除磁珠。
    5、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
    6、重复步骤5。
    7、保持离心管固定于磁力架上,室温静置10分钟,使磁珠在空气中干燥。
    8、将离心管从磁力架上取下,加入30μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟。
    9、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将洗脱液转移至一个新的PCR管中约25μl,DNA文库在-20℃保存。

    文库质量检测

    文库浓度:
      为了得到高质量的测序结果,需要对DNA文库进行精确定量,首先推荐使用Real-time PCR方法对DNA文库进行绝对定量。此外,还可使用荧光染料法,如Qubit法或荧光染料picogreen法,此处请勿使用基于吸光度测量的定量方法。最终可使用以下近似公式换算DNA文库的摩尔浓度。
    文库平均总长度 近似转换公式 成簇反应DNA文库浓度
    200 bp 1ng/μl=7.5 nM 6-12 pM
    300 bp 1ng/μl=5.0 nM 6-12 pM
    400 bp 1ng/μl=3.8 nM 6-12 pM
    500 bp 1ng/μl=3.0 nM 6-12 pM


    文库长度分布
    制备好的DNA文库可用琼脂糖凝胶电泳或Agilent 2100 Bioanalyzer检测DNA文库中的片段长度分布范围。

    产品细节图片1
    图1:Agilent 2100 Bioanalyzer文库分析结果
    L:DNA Ladder;
    S:使用200ng人基因组DNA构建文库,磁珠进行选择回收后结果。

    文库结构
    5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT [Target Sequence] TGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACNNNNNNATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
    NNNNNN:index, 6bases

    储存条件:-20℃

    北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:

    ·miRNA提取试剂盒
    编号:WE0195
    英文名称:miRNA Purification Kit
    规格:50次
      本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA, 还可以提取siRNA,snRNA等其他小于200nt的小分子RNA,同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合,独特的裂解液在有效抑制RNases的同时,可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中,如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广,制备的RNA纯度高,可直接用于敏感的下游应用,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。

    试剂盒组成
    组份 50次
    TRIzon Reagent 60ml
    Buffer RWT(浓缩液) 15ml
    Buffer RW2(浓缩液) 11ml
    RNase-Free Water 10ml
    吸附柱RM及收集管 50套
    吸附柱RS及收集管 50套
    RNase-Free离心管(1.5ml) 50个

    保存条件:TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其它组分室温(15~30℃)。

    自备试剂:*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
    1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
    2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
    3)配制溶液应使用无RNase的水。
    4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
    2、提取的样品避免反复冻融,否则影响miRNA提取的量和质量。
    3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
    4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。

    操作步骤

    方法一:miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
    1、样品处理
    ①组织:将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent,震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
    ②单层培养细胞:吸去培养液,加入TRIzon Reagent,每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
    ③细胞悬液:离心得到细胞沉淀,弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
    ④血浆或血清:取200μl血浆或血清样本,加入5倍体积TRIzon Reagent,震荡混匀30秒。
    2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使其充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
    3、可选步骤:4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心5分钟,取上清,转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等,可选做此步骤)。
    4、向上清中加入*仿,每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置5分钟。
    5、4℃ 12000rpm离心15分钟,样品分为三层:红色有机相,中间层,无色水相,将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
    6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇, 混匀,将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱,请分多次转入。12000rpm离心30秒,离心后弃掉吸附柱RM,保留流出液。
    7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇,混匀。
    8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱,请分多次转入。12000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
    9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇),12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
    10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
    11、重复步骤10。
    12、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟,以彻底晾干。
    注意:此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
    13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
    注意:
    1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
    2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
    3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中,重复步骤13。

    方法二:总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
    1~5步骤同方法一。
    6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇,混匀。
    7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中,请分多次转入。12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
    8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
    9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
    10、重复步骤9。
    11、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟,以彻底晾干。
    注意:此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
    12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中,向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,室温 12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
    注意:
    1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
    2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
    3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中,重复步骤12。

    储存条件:室温(15~30℃)。


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    ·50×TAE
    编号:WE0216
    规格:500ml
    本品为50×Tris-乙酸缓冲液,是常用的核酸电泳缓冲液。

    ·IHC复染试剂(改良型苏木素)
    编号:WE0322
    英文名称:Improved-Hematoxylin
    规格:10ml
      苏木精是一种碱性染料,它被氧化后生成氧化苏木精即苏木素后,可将细胞核和细胞内核糖体等嗜碱性结构染成蓝紫色,是常用的细胞核复染试剂。本产品是经改良的Mayer’s苏木素,不含酒精,可用于免疫组化DAB或AEC显色后的细胞核复染。其染色强度适中,一般不需要进行分化处理。复染后核着色鲜亮,背景清晰。

    注意事项
    1、操作时应佩戴手套。
    2、如核染色过深,可用1%盐*(代"酸")酒精分化适当液分化后,再用PBS或去离子水浸泡切 片3-5分钟,使胞核返蓝。
    3、为得到最佳实验结果,请根据实验具体需求,调整试剂用量。

    操作步骤
    1、免疫组化常规操作完成后,DAB或AEC显色(HRP系统)。
    2、显色强度合适时,用自来水冲洗终止显色。
    3、甩去样品上的自来水,滴加适量改良型苏木素以覆盖整个组织,复染30秒至3分钟。
    4、用自来水完全冲洗掉复染液,PBS或去离子水浸泡切片3-5分钟,使胞核返蓝。
    5、脱水、透明、封片。

    实验图例:

    乳腺癌 CK19 胞浆阳性使用DAB显示试剂盒(WE0323)显色,改良型苏木素(WE0322)复染,结果图

    储存条件:室温


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    BTN51207 Pfu DNA聚合酶 Pfu DNA Polymerase
    ARB11690 人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)酶免分析 Human glucokinase regulatory protein,gkrp ELISA KIT
    ARB13562 兔子可溶性P选择素(sP-Selectin)免费代测 Rabbit soluble P-Selectin,sP-Selectin ELISA KIT
    PY01-001-1  蛋白胨(发酵级)  1公斤  
    ARB13672 兔半胱*酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)酶免分析 Rabbit cystatin c,cys-c ELISA KIT
    ARB13323 山羊雌二醇(E2)elisa检测 
    PY02-145  改良Skirrow氏琼脂基础  250克  
    37224-29-6 Sephadex G-75 medium(葡聚糖凝胶G-75)
    ARB12301 大鼠抗单核细胞抗体(AMA)含量测试 Rat anti-monocyte antibody,ama ELISA KIT
    ARB12729 小鼠5羟色胺(5-HT)酶标法分析 Mouse 5-hydroxytryptamine,5ht ELISA KIT
    过氧化*酶(牛肝) Sephacryl S-100 HR 9001-05-2
    BTNpyj19 细胞培养基 Cell Culture Medium
    PY01-088  聚蛋白胨  250克  
    ARB11002 人补体1抑制物抗体(C1INH)酶免分析 Human complement 1 inhibitor autoantibody,c1inh ELISA KIT
    乙二醇双(2-*基乙基)四乙酸四* Ammonium ferric sulfate dodecahydrate 13368-13-3
    ARB10811 人抗百日咳病毒(PT-Ab)ELISA代测服务 Human anti-pertussiu toxin,pt-ab ELISA KIT
    N6-异戊烯基腺嘌呤 Creatine phosphokinase(rabbit muscle) 2365-40-4
    L-肌肽 DL-2-Aminobutyric acid 305-84-0
    F030404 胶体金标记小鼠抗猴IgG抗体 Monoclonal Mouse Anti-Monkey IgG*GOLD
    BL1238 SOC液体培养基(干粉)

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