- ¥1490
- 联迈生物
- LM13-81800
- 中国/上海
- 2025年11月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Vancomycin-Resistant Enterococcus(VRE)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
50次
中文名称：耐万古霉素肠球菌PCR试剂盒
英文名称：Vancomycin-Resistant Enterococcus(VRE)
规格：50次
运输：低温
保存：-20度
有效期：一年
货期：一周
产品及特点
1.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2.荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
3.提供阳性对照，便于分析实验结果。
4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳，本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
1.在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4.NC 管中不加任何阳性对照。
5.从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
一．PCR 检测（20 μL 体系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验一般来说，万古霉素主要是用来杀害像肠球菌、链球菌及葡萄球菌这类革兰氏阳性菌的抗生素，但对革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）则比较无效，其主要原因是革兰氏阴性菌在细胞壁外尚有一层外膜，它会阻碍万古霉素直接与细胞壁前质结合，因此革兰氏阴性菌天生就对万古霉素具有很高的抵抗力。 万古霉素类似杯形的分子结构与细胞壁前质末端的 D-Ala-D-Ala 在立体上有很好的契合，并以五个氢键呈现结合的专一性，使得万古霉素易于跟细胞壁前质末端的 D-Ala-D-Ala 结合，因而阻止细胞壁前
在一些对万古霉素具抗药性的细菌研究中，抗万古霉素肠球菌可说是被系统化研究最为透彻的，一般根据其对万古霉素及壁霉素的抗药能力，而区分为 vanA、vanB 及 vanC 三种菌株。 vanA 菌是从屎肠球菌、粪肠球菌中分离出来的，一般而言，它们对万古霉素及壁霉素都具有高度抗药性。从生化的角度来看，vanA 型菌株的抗药性基因是位于质体上，它可经由接合作用将含有抗药性的基因传递到另一株细菌内，而这种传递方式亦可能发生在不同的菌种间，因而导致抗药性的扩散与蔓延，这也是近几年抗万古霉素
率12.6%-57%） 临床上以粪肠球菌感染居多约占80%，但在过去20 年内，屎肠球菌所引起的感染上升到30%-40%，中国屎肠球菌所引起的感染上升的速度更快，Mohnarin2008 年度报告屎肠球菌所引起的感染已占肠球菌40%-50%，1979 年，Evances 首次报道高耐庆大霉素肠球菌，80 年代表现为耐β-内酰胺类及糖肽类，1986 年首次发现耐万古霉素肠球菌（VRE）。 生物学特性（一）个体形态特性G+C 兼性厌氧，圆形、卵圆形；单个、成对、短链状、H2O2（-）、荚膜（-）、芽孢
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