鸡源性成分(Chicken)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法

【产品名称】

通用名称：鸡源性成分(Chicken)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)
英文名称：Chicken derived ingredients Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】48T/盒

【预期用途】

动物源性成分广泛分布于食品、饲料、化妆品等，与人们的生活息息相关，其中食品和饲料所占的比例最大。肉及肉制品掺假成为世界各国共同关注的热点问题，    肉食品及其饲料的安全隐患直接关系到人类的安危。近几十年来，以 PCR 技术为核心的动物源性成分检测获得了广泛应用。
本试剂盒适用于动物组织以及食品、饲料等样本中鸡源性成分的检测。

【检验原理】

本试剂盒对鸡源性成分基因保守区设计特异性的引物和探针[1-3]，用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

【试剂组成】

名 称	规 格
酶液	50μL×1 管
Chicken 反应液	1.0mL×1 管
Chicken 阳性质控品	50μL ×1 管
阴性质控品	250μL ×1 管

注：
1.不同批号试剂不能混用。
2.试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次。有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过 6 个月，标本运送应采用 0℃冰壶。

鸡源性成分(Chicken)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)【使用方法】

1.样品处理（样本处理区）
1.1.样本前处理：
取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2.
DNA 提取DNA 的提取推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2.试剂配制（试剂准备区）根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
 

试剂	Chicken 反应液	酶液
用量	20μL	1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
3.加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4.PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1.将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2.设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25ul；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

4.3.推荐循环参数设置：
 

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。